生殖工程试管婴儿.ppt

第31页,共60页，星期六，2024年，5月第32页,共60页，星期六，2024年，5月第33页,共60页，星期六，2024年，5月影响ICSI成功的主要因素ICSI成功与否主要看受精、卵裂及妊娠率，除技术因素外，径自、卵子状态及卵子激活等都直接影响其成功。①显微操作技术对ICSI的影响体外操作过程不超过5分钟注射针内径5~8微米之间固定针外径120微米，内径15~40微米②精子状态对ICSI的影响第34页,共60页，星期六，2024年，5月影响ICSI成功的主要因素③卵子对ICSI的影响卵子状态卵母细胞成熟程度女性年龄影响卵子质量卵子激活以放出第二极体、形成雌雄原核为标志并最终启动卵子代谢的一系列变化第35页,共60页，星期六，2024年，5月ICSI的风险与出生缺陷与ICSI操作无关卵巢过度刺激综合征、多胎妊娠、异位妊娠与ICSI操作有关基因缺陷垂直传播外源DNA污染第36页,共60页，星期六，2024年，5月三、细胞核移植技术----第四代试管婴儿（一）、概论什么是克隆？“clone”：单性生殖，本意是指通过无性形式由单个细胞产生的和亲代非常相似的后代。动物克隆：指一个动物经无性繁殖或孤雌生殖而产生的多个后代，克隆的所有成员遗传物质完全相同。第37页,共60页，星期六，2024年，5月人有无自然单性生殖？古代传说：轩辕黄帝之母“感电光绕头而有娠”，生黄帝1955年，Spuwary,相信人类有单性生殖至今尚无一例经得起严格的科学检验生物进化证明：有性生殖是从无性生殖发展而来，刻意对人进行无性生殖意味着退化！第38页,共60页，星期六，2024年，5月细胞核移植是指将发育不同时期的胚胎或成体细胞核经显微手术和细胞融合方法移植到去核卵母细胞中，或将体细胞核直接注入去核卵母细胞中，重新组成胚胎并使之发育成子代个体。克隆技术之所以引人关注，是因为它在医疗和畜牧业方面有深远意义第39页,共60页，星期六，2024年，5月克隆研究大事记1938年，德国科学家Spemann首次提出动物细胞克隆设想1952年，美国学者Briggs和King首先在青蛙身上进行克隆实验1970年，克隆青蛙取得突破进展1981年，胚胎克隆鼠成功1984年，胚胎克隆羊成功第40页,共60页，星期六，2024年，5月第41页,共60页，星期六，2024年，5月克隆研究大事记1994年，用发育120个细胞阶段的胚胎细胞核移植成功，获得克隆牛1997年，英国Wilmut体细胞克隆羊成功“多莉”1998年，英国PPL医疗公司，克隆牛“弗逊先生”1998年，克隆鼠克隆出克隆鼠1999年，美国克隆第一只雄性鼠2000年，美国牛耳皮细胞克隆6头牛2001年，美国克隆出第一个灵长类动物恒河猴第42页,共60页，星期六，2024年，5月第43页,共60页，星期六，2024年，5月二、哺乳动物细胞核移植方法（一）重构卵的形成1、供体细胞和受体细胞的选择和处理供体细胞：即细胞核的来源早期胚胎细胞、干细胞、体细胞受体细胞：提供去除核后的只含有细胞质的细胞MII期卵母细胞、受精卵、融合后2细胞胚第44页,共60页，星期六，2024年，5月2、细胞核移植

包括受体细胞核去除和供体细胞核移入受体细胞核的去除移核带下移植胞质内注射第45页,共60页，星期六，2024年，5月第46页,共60页，星期六，2024年，5月细胞融合融合方法：化学融合、病毒融合、电融合电融合：通过外加脉冲电场来改变细胞膜通透性，从而促进膜内外物质交换，当细胞膜紧密接触时，电击可以使接触膜上形成孔洞，导致细胞融合。融合液：0.27mol/L蔗糖液、甘露醇溶液电融合方法第47页,共60页，星期六，2024年，5月（二）重构卵的活化处理一般电融合完成后，卵子因电刺激而被激活，但也有的核移植重构卵还需进一步充分激活才能发育。应用较多的化学激活剂有7%乙醇、离子霉素、星形孢菌素等第48页,共60页，星期六，2024年，5月第49页,共60页，星期六，2024年，5月（三）移核胚的体外培养和胚胎移植与IVF-ET相同体外培养一段时间