trap提端粒酶的原理.pdfVIP

乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》

基本原理

利用端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添

加6个碱基的重复序列的特性，采用PCR方法扩增此重复序列，并进而用聚丙烯酰胺(PAGE)

凝胶电泳显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立的TRAP法，其主要原理如下：首

先合成一个18nt的TS做上游引物，端粒酶结合TS末端的GTT并合成AGGGTTAG，然

后每经过一次转位合成一个ggttag的6碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入CX做下游引

物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。

我公司提供的PCR端粒酶活性检测试剂盒基于同样的的原理，利用银染技术检测端粒

酶的活性。阳性结果在凝胶电泳上显示相隔6bp的梯状条带，条带的多、寡、深或浅表示端

粒酶活性的大小。TRAP-银染法保留了传统TRAP法灵敏度高、特异性强等优点，避免了

同位素的放射污染。同时，还增设了内标准物，提供阳性对照品，优化了引物设计，使PCR

效果进一步提高，使之能够高灵敏的检测到细胞和组织提取物中端粒酶的活性。

基本原理

利用端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添

加6个碱基的重复序列的特性，采用PCR方法扩增此重复序列，并进而用聚丙烯酰胺(PAGE)

凝胶电泳显示6个碱基差异的梯带。1994年Kim建立的TRAP法，其主要原理如下：首

先合成一个18nt的TS做上游引物，端粒酶结合TS末端的GTT并合成AGGGTTAG，然

后每经过一次转位合成一个ggttag的6碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入CX做下游引

物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。

我公司提供的PCR端粒酶活性检测试剂盒基于同样的的原理，利用银染技术检测端粒

酶的活性。阳性结果在凝胶电泳上显示相隔6bp的梯状条带，条带的多、寡、深或浅表示端

粒酶活性的大小。TRAP-银染法保留了传统TRAP法灵敏度高、特异性强等优点，避免了

同位素的放射污染。同时，还增设了内标准物，提供阳性对照品，优化了引物设计，使PCR

效果进一步提高，使之能够高灵敏的检测到细胞和组织提取物中端粒酶的活性。

TRAP-银染法端粒酶活性检测试剂实验方法

试剂盒组份

组分50次实验量

Washbuffer11ml

Lysisbuffer2.2ml

10×PCRbuffer140μl

dNTPs165μl

Primer1165μl

Primer228μl

Primer3110μl

Taq-DNAPolymerase17μl

ddH2O750μl

阳性对照模板55μl

乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》

内标准模板55μl

操作步骤

1、端粒酶的提取

⑴手术后取下的活组织，立即保存在液氮之中。

⑵40～100mg冷冻(-70%℃)组织用无菌眼科手术剪尽量