高效液相色谱法测定盐酸纳洛酮注射液的有关物质研究(精编文档)优选.pdfVIP

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高效液相色谱法测定盐酸纳洛酮注射液的有关物质研究

摘要：目的探讨应用高效液相色谱法（HPLC）测定盐酸

纳洛酮注射液的有关物质。方法采用自身对照法。色谱柱为C18

柱（150mm×4.6mm，5μm），流动相为1-辛烷磺酸钠溶液与甲

醇梯度洗脱；流速1.0ml?min-1；检测波长为229nm；柱温为30℃。

结果盐酸纳洛酮降解产物与中间体能够与主峰较好的分离。结

论在该色谱条件下，检测结果灵敏、准确、简便，专属性强。

关键词：高效液相色谱法；盐酸纳洛酮注射液；有关物质测

定

盐酸纳洛酮是阿片受体拮抗药，临床临床用于解救麻醉性镇

痛药急性中毒，拮抗麻醉性镇痛药的残余作用，解救急性乙醇中

毒等[1]。由于本品不稳定，在放置过程中有关物质增加速度快，

产品不稳定，因此有必要建立能稳定、准确检测盐酸纳洛酮注射

液有关物质变化情况的检测方法。2010版中国药典中对于盐酸纳

洛酮注射液，有关物质项下只有检查2，2’-双纳洛酮，为了进

一步提升药品质量，参照中国药典、美国药典及英国药典对盐酸

纳洛酮注射液有关物质方法进行改进，使其可以很好的检查盐酸

纳洛酮注射液的2，2’-双纳洛酮，单个未知杂质及总杂质。该

HPLC方法操作简便，结果准确，重复性高。

1仪器和试药

1.1仪器waters2695四元低压梯度高效液相色谱仪；ODS

色谱柱（4.6mm×150mm，5μm），KQ-250DB型超声波清洗器。

1.2试药盐酸纳洛酮对照品（批号171239-201106）由购于中

国药品生物制品检定所；盐酸纳洛酮注射液（批号：市售品规格1ml：0.4mg）由江苏恩华药业股份有限公司提供；

分析纯试剂包括辛烷磺酸钠、甲醇、氯化钠。

2测定方法

2.1色谱分析条件色谱柱为ODS色谱柱（4.6mm×150mm，

5μm）；流动相：辛烷磺酸钠溶液（取1-辛烷磺酸钠2.0g与氯化

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钠2.0g，加水1000ml使溶解，摇匀）为流动相A；甲醇为流动相

B；按表1进行梯度洗脱；检测波长为229nm；流速1.0ml；柱温

30℃；进样量10μl。供试品溶液的色谱图中如有与系统适用性试

验溶液色谱图中杂质II（2，2’-双纳洛酮）保留时间一致的峰，

其峰面积乘以校正因子0.53，不得大于对照溶液主峰面积1/2

（0.5%），其他单个杂质不得大于对照溶液主峰面积的1/5

（0.2%），各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积（1.0%）。

2.2分析样品的制备供试品溶液：直接取用盐酸纳洛酮注射

液作为供试品溶液；自身对照溶液精密量取供试品溶液1ml，置

100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2.3系统适应性验证取盐酸纳洛酮对照品适量，加0.1mol/L

盐酸纳洛酮溶液溶解并制成每1ml中含0.2mg的溶液，取10ml，

置25ml量瓶中，加0.4%三氯化铁溶液1ml，置水浴中加热10min，

放冷，用水稀释至刻度，摇匀，作为含2，2’-双纳洛酮的系统

适用性溶液。结果见图1（注：9.251min处峰为主峰，29.185min

处峰为2，2’-双纳洛酮峰）。

2.4与合成中间体分离度验证分别精密称取中间体Ⅰ～Ⅶ

适量，各置100ml量瓶中，加溶剂溶解稀释，制成0.1mg/ml的

溶液；精密量取各溶；28.260min为液1.0ml，置100ml量瓶中，

加流动相定容，摇匀，即得1μg/ml的中间体混合液，依照有关

物质检测方法检测。结果见图2（注：3.102min为中间体Ⅴ；

6.076min为中间体Ⅶ；7.400min为中间体Ⅵ；9.793min为纳洛酮

主峰；13.895min为中间体Ⅳ；15.641min为中间体Ⅲ；23.269min

为中间体Ⅱ；26.191min为中间体Ⅰ；28.260min为2，2’-双纳洛

酮峰）。

2.5专属性试验空白辅料溶液与供试品分别进样10μl，记录

色谱图。结果见图3，4。由结果可知，空白辅料不干扰盐酸纳

洛酮主峰及杂质峰的测定。

2.6精密度验证取自身对照液，连续测定6次计算得主峰面

积的RSD