高考生物备考-考点80 PCR技术.pdf

1.PＣR原理

（1）细胞内DＮA复制条件

条件组分作用

模板DNA的两条单链提供复制的模板

原料［来源：学§科§网Z§X§X§K]四种脱氧核苷酸合成ＤNA子链的原料

解旋酶xxk.Cｏm］[来源：学科打开DNA双螺旋

酶

DNA聚合酶催化合成ＤNA子链

能量ＺＡＴP为解螺旋和合成子链供能

为DＮＡ聚合酶提供合成的3’端起

引物RＮA

点

（2)细胞内DNA复制过程

①DNＡ的两条链是反向平行的，通常将DNA的羟基末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5端

。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从３端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物.DN

A的合成方向总是从子链的5’端向3端延伸。

②在DNA的复制过程中，复制的前提是双链解开。在体外可通过控制温度来实现。在８0~100℃

的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。ＰCR利用了ＤNA的

热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。由于PCR过程的温度高，导致DNＡ聚合

酶失活，后来耐高温的DＮA聚合酶的发现和应用,大大增加了PCR的效率。

③ＰCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行，需提供DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种

引物，四种脱氧核苷酸,耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DＮA复制在体外反复进行.

2.PCR的反应过程

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PＣR一般要经历三十多次循环,每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。从第二轮循环开始,上一次

循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNＡ单链会与引物Ⅱ结合,进行ＤＮＡ的延

伸，这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列成指数扩

增.

3．实验操作

（1)PCR反应体系：缓冲液、ＤＮA模板,四种脱氧核苷酸原料、热稳定的DNA聚合酶、两种RＮA引物、

水。

(2）实验操作步骤

①按照PＣR反应体系配方配制反应液；

②将PCR反应体系５0μＬ用微量移液器转移到微量离心管（0.５mL）中；

③将微量离心管放到PＣR仪中;

④设置PCＲ仪的工作参数；

⑤ＤNA在PCR仪中大量扩增.学科网

考向PＣR的反应过程

１．聚合酶链式反应（ＰCＲ)是一种体外迅速扩增ＤNA片段的技术.PCR过程一般经历下述30多次循环

95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→7２℃下引物链延伸(形

成新的脱氧核苷酸链).下列有关PCＲ过程的叙述中不正确的是

A。变性过程中破坏的是ＤNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现

B.复性过程中引物与DNＡ模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的ﻭC.延伸过程中需要DNA聚合酶、

ATＰ、四种核糖核苷酸

D.PCＲ与细胞内DＮA复制相比所需酶的最适温度较高

【参考答案】C

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【试题解析】变性过程中破坏的是DＮA分子内碱基对之间的氢键,解旋酶也具有该作用,Ａ正确。复性

过程中引物与ＤNＡ模板链的