DB45T 1669-2018 陆川猪肉及其制品的DNA分子鉴定方法.docxVIP

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DB45

广西壮族自治区地方标准

DB45/T1669—2018

陆川猪肉及其制品的DNA分子鉴定方法

DNAmolecularidentificationmethodofLuchuanpigmeatanditsproducts

2018-03-25发布2018-04-25实施

广西壮族自治区质量技术监督局发布

I

DB45/T1669—2018

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 2

5仪器与试剂 2

6鉴定步骤 2

7结果判定与表述 3

8实验室防污染措施 4

附录A(资料性附录)陆川猪肉特异性条带的核苷酸序列信息 5

附录B(规范性附录)PCR所用引物序列 6

附录C(资料性附录)样品DNA提取方法 7

附录D(资料性附录)1.8%琼脂糖凝胶的制备 8

II

DB45/T1669—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由广西大学提出。

本标准起草单位：广西大学、广西分析测试研究中心、广西经贸职业技术学院、广西陆川县质量技术监督局。

本标准主要起草人：黄丽、滕建文、杨磊、黄岛平、庞理松、夏宁、林葵、韦保耀、庞丽、李中宇。

1

DB45/T1669—2018

陆川猪肉及其制品的DNA分子鉴定方法

1范围

本标准规定了陆川猪肉及其制品的DNA分子鉴定的术语和定义、原理、仪器与试剂、鉴定步骤、结果判定与表述和实验室防污染措施的要求。

本标准适用于广西壮族自治区内陆川猪肉及其制品的DNA分子鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测NY/T2993陆川猪

3术语和定义

以下术语和定义适用于本文件。

3.1

陆川猪肉Luchuanpigmeat

来源于NY/T2993中纯种陆川猪生猪，以及以纯种陆川猪为母系进行杂交后的杂元陆川猪生猪的酮体。

注：杂元陆川猪包括二元杂陆川猪和三元杂陆川猪。

3.2

陆川猪肉制品meatproductsofLuchuanpig

以陆川猪肉为原料，经过相应工艺加工制成的扣肉、腊肉、腊肠、猪蹄等肉制品的总称。

3.3

聚合酶链反应polymerasechainreaction;PCR

由“热变性→复性→延伸”三步反应组成一个循环，经过多次循环反应，使目标DNA得以大量扩增的一种在体外快速扩增特定基因或DNA片段的方法。

3.4

特异性引物specificprimer

在PCR反应中与模板DNA两端分别特异性结合，针对特定模板DNA片段设计的两段与模板两端分别互补的一对寡核苷酸序列。

4原理

2

DB45/T1669—2018

利用DNA提取试剂盒，提取样品中的DNA,以提取的DNA为模板进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，从而对生鲜猪肉及制品的原料属性是否归属陆川猪肉进行判断。特异性条带的核苷酸序列信息参见附录A。

5仪器与试剂

5.1主要仪器及耗材

5.1.1PCR仪。

5.1.2电泳仪。

5.1.3凝胶成像仪。

5.1.4高速冷冻离心机。

5.1.5小型离心机(7000rpm)。

5.1.6冷藏冷冻冰箱。

5.1.7漩涡振荡器。

5.1.8微量移液器(10HL、100HL、1000HL)。

5.1.90.2mL普通PCR管。

5.1.10一次性PE手套。

5.1.111.5mL离心管。

5.2主要试剂

5.2.1除另有规定外，所有试剂均为分析纯或者生化试剂。

5.2.2实验用水：应符合GB/T6682中一级水的规格。

5.2.3DNA提取试剂盒。

5.2.41×TAE缓冲液。

5.2.52×EsPCRMasterMix(含溴酚蓝染料)。

5.2.6Marker为100bpPlusDNAladder。

5.2.7琼脂糖；电泳纯。

5.2.8嗅化乙锭(EB