基于G-四链体的荧光传感器的构建及其应用于甲基转移酶与lncRNA的检测.pdf

目录

摘要I

AbstractIII

第一章前言1

1.1表观遗传生物标志物概述1

1.1.1DNA甲基化修饰2

1.1.2非编码RNA4

1.2荧光生物传感器检测表观遗传生物标志物6

1.2.1荧光生物传感器检测DNA甲基转移酶7

1.2.2荧光生物传感器检测非编码RNA11

1.3本论文的研究内容16

第二章基于GlaⅠ核酸内切酶介导的双引物滚环扩增构建G-四链体荧光传感器用于DNA甲

基转移酶的检测18

2.1引言18

2.2实验部分19

2.2.1仪器和试剂19

2.2.2M.CviPI甲基转移酶的检测21

2.2.3荧光光谱测定21

2.2.4凝胶电泳分析21

2.2.5抑制剂分析21

2.3结果与讨论22

2.3.1甲基转移酶的检测原理22

2.3.2可行性验证23

2.3.3反应的优化24

2.3.4概念证明26

2.3.5灵敏度分析27

2.3.6特异性分析27

2.3.7抑制剂分析和动力学分析28

2.3.8回收率实验29

2.4结论30

第三章基于生物可降解材料ZIF-8辅助链置换反应构建G-四链体荧光传感器用于长链非

编码RNA的检测与细胞成像31

3.1引言31

3.2实验部分32

3.2.1实验试剂与材料32

3.2.2实验步骤34

3.2.3荧光光谱测定和凝胶电泳分析34

3.2.4ZnPc@ZIF-8NPs及ZnPc@ZIF-8/DNANPs的制备34

3.2.5细胞培养35

3.2.6细胞内荧光成像35

3.2.7细胞内ROS检测35

3.2.8细胞活性检测35

3.3结果与讨论36

3.3.1实验原理36

3.3.2材料表征38

3.3.2可行性验证41

3.3.3实验条件优化43

3.3.4灵敏度分析44

3.3.5特异性分析45

3.3.7细胞内荧光成像45

3.3.8细胞内ROS检测50

3.3.9细胞活性检测52

3.4结论55

第四章总结56

参考文献57

攻读学位期间发表的学术论著70

致谢71

摘要

表观遗传生物标志物（如核酸、酶等）的检测在疾病早期诊断、治疗和预后监测中

起着重要作用。荧光检测方法具有极高的时空分辨率，已广泛应用于表观遗传生物标志

物的检测。在癌症早期，某些与癌症相关的表观遗传生物标志物（如lncRNA，甲基转移

酶等）在生物体内含量极低，需要设计和构建选择性更好、灵敏度更高的荧光生物传感

器，来实现临床早期诊断和治疗。G-四链体是由富含鸟嘌呤（G）的寡核苷酸形成的独特

三维结构。作为一种重要的功能性核酸，G-四链体与荧光染料结合后的优异光学性能为

开发新型适体传感器提供了理论基础，为生物标志物的检测提供了一个多功能的平台，

在促进临床诊断和药物开发等方面显示出巨大的潜力。