基于等温扩增的生物传感器超灵敏检测胞苷脱氨酶和长链非编码RNA.pdf

目录

摘要I

AbstractIII

第一章绪论1

1.1胞苷脱氨酶1

1.1.1胞苷脱氨酶概述1

1.1.2胞苷脱氨酶的检测方法2

1.2长链非编码RNA（LncRNAs）2

1.2.1长链非编码RNA概述2

1.2.2长链非编码RNA的检测方法3

1.3基于核酸的等温扩增方法6

1.3.1酶辅助的核酸等温扩增7

1.3.2无酶核酸等温扩增17

1.4本工作的研究内容23

第二章脱氨触发的指数信号扩增在单细胞水平上对胞苷脱氨酶进行化学发光检测25

2.1引言25

2.2实验部分26

2.2.1试剂及仪器26

2.2.2APOBEC3A的检测27

2.2.3凝胶电泳分析28

2.2.4实时荧光测量28

2.2.5化学发光测量28

2.2.6抑制剂筛选28

2.2.7细胞培养和细胞提取物的制备29

2.3结果与讨论29

2.3.1APOBEC3A检测原理29

2.3.2可行性验证30

2.3.3优化实验条件32

2.3.4灵敏度分析35

2.3.5特异性分析及抑制剂分析35

2.3.6回收率分析36

2.3.7实际样品分析37

2.4结论37

第三章CRISPR/Cas13a反式切割驱动的量子点纳米传感器用于超灵敏检测乳腺组织中的

长链非编码RNA39

3.1引言39

3.2实验部分40

3.2.1试剂及仪器41

3.2.2LncRNASNHG15检测43

3.2.3凝胶电泳分析43

3.2.4荧光测量44

3.2.5单分子成像和数据分析44

3.2.6细胞培养、细胞及组织中总RNA的提取44

3.2.7qRT-PCR45

3.3结果与讨论45

3.3.1LncRNA检测原理45

3.3.2可行性验证46

3.3.3单分子成像49

3.3.4优化实验条件50

3.3.5底物探针的设计与评估53

3.3.6灵敏度分析54

3.3.7特异性分析55

3.3.8细胞中SNHG15表达的测定57

3.3.9临床样本分析58

3.4结论59

第四章总结61

参考文献62

攻读学位期间发表的学术论文及获奖情况75

致谢76

摘要

生物标志物是一种能够标记生命体内各种微观结构和功能变化的生化指标。这些指标

可以是核酸、蛋白质、酶、小分子乃至整个细胞，并且通常在生物体内含量极低，因此，

亟待开发精准、灵敏的检测方法。创新且高效的基于等温扩增的生物传感器，已成为生物

标志物检测领域的重要工具，其优势在于能够实现快速、高灵敏以及高效的信号扩增。在

此，我们开发了两种基于等温扩增的生物传感器，实现对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多

肽3A（ApolipoproteinBmRNA-editingenzymeca