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长风破浪会有时，直挂云帆济沧海。——李白
微生物检验的基本操作技术--无菌操作
一、无菌操作技术
1、定义
是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和
保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；
无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生
物实验准确和顺利完成的重要环节。
2、内容
无菌操作技术主要包括两方面：
1）创造无菌的培养环境。包括提供密闭的培养容器、培养
容器的灭菌、培养基的灭菌等；
2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。
包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作
工具、器皿灭菌、操作方法等。
3、无菌操作原则
1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，
接种时必须穿工作服、戴工作帽应在进无菌室前用肥皂洗
手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；
2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行
接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开
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长风破浪会有时，直挂云帆济沧海。——李白
包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高
压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。严禁用手直接
拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；
3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使
用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿
边；
4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或
样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰
消毒；
5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，
必须时还要烧到环和针与杆的连接处；
6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得
直接用口吸。倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和
加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。
二、无菌操作的环境要求
1、无菌室
（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；
（2）无菌室的消毒和防污染
•每日（使用前）紫外线照射（0.5~1小时）；
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•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行
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