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《生物制药技术》实验指导

实验一金霉素链霉菌培养基的制备

实验目的：

1、学会培养基的配制

2、掌握灭菌方法。

实验原理：

金霉素链霉菌（Streptomycesaureofaciens）亦称“金色链霉菌”，放线菌门

(Actinobacteria)，放线菌纲(Actinobacteria)，放线菌目(Actinomycetales)，链霉菌科

(Streptomycetaceae)，链霉菌属(Streptomyces)。在固体培养基上产生金色色素，故名。其菌

落为草帽型,菌落直径一般为3～5毫米,表面较平坦,中间有隆起。菌落开始为白色，长孢

子后变青色。抗菌素工业上用以生产金霉素。

放线菌是一类介于细菌与真菌之间的单细胞微生物。放线菌在土壤中分布最多，大多

数生活在含水量较低、有机质丰富和微碱性的土壤中。多数情况下，泥土中散发出的“泥腥

味”就是由放线菌中链霉菌产生的土腥素造成的。放线菌大都好氧，属于化能异养，菌丝纤

细，分枝，常从一个中心向周围辐射生长。因其生长具辐射状，故名放线菌。放线菌能像真

菌那样形成分枝菌丝，并在菌丝末端产生外生的分生孢子，有些种类甚至形成孢子囊，因而

曾被误认是真菌。但其菌落较小而致密，不易挑取。不少菌种在医药、农业和工业上广泛应

用，可产生抗菌素，现已发现和分离出的由放线菌产生的抗生素多达4000多种，其中，有

50多种抗生素已经广泛地得到应用，如链霉素、红霉素、土霉素、四环素、金霉素、卡那

霉素、氯霉素等用于临床治疗人的多种疾病；有些可生产蛋白酶、葡萄糖异构酶；有的用于

农业生产，如灭瘟素、井冈霉素、庆丰霉素等。

四环素类抗生素是由链霉菌生产或经半合成制取的一类广谱抗生素。抗菌谱极广，包括

革兰氏阳性和阴性菌、立克次体、衣原体、支原体和螺旋体。品种主要包括金霉素、四环素

和土霉素。

器材：

1ml移液枪；铝锅；电炉

试剂：

NaBr母液（0.1g／ml）

KCl母液（0.1g／ml）

M-促进剂母液（2.5mg／ml）

实验步骤：

1．种子培养基

种子培养基(g／L)：可溶性淀粉40，黄豆饼粉20，酵母粉5，蛋白胨5，CaCO4，

3

(NH4)SO3，MgSO·7HO0.25，KHPO0.25。

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先称取黄豆饼粉20g，单独煮沸10分钟，加入少量凉水降温，4层纱布压榨取汁，与

其它称好的各成分混合，定容至1L。

每50ml分装到250ml三角瓶中，每组2瓶。

2．定向发酵培养基

1

发酵培养基(g／L)：可溶性淀粉100，黄豆饼粉40，蛋白胨15，CaCO5，酵母粉2.5，

3

(NH4)SO3，MgSO·7HO0.25，α—淀粉酶0.1。

2442

配制方法同种子培养基，配好后分装到500ml三角瓶中，每瓶100ml，分别加入如下成

分，比较它们对四环素产量的影响：

(1)对照(不加其他成分)；

(2)加入NaBr母液至终浓度为2g／L；

(3)加入KCl母液至终浓度为2g／L；

(4)加入NaBr母液至终浓度为2g／L及M-促进剂母液至终浓度为0.025g／L。

每组各配一瓶。

3．灭菌

将封好口的培养基121℃灭菌30min。同时灭1ml剪口移液枪头。

（总过程：称量——溶化——定容——分装——封口——灭菌）

注意事项：

1．黄豆饼粉煮沸取汁。

2．培养基封口最好用8层纱布或棉花塞，最好不用橡胶塞，以增加透气性。

3．灭菌时锅内要补足水分。由于灭菌锅较大，升温排气一定要充分（10min）。

补充阅读：

工业发酵中利用生产菌发酵得出最终产物是