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方法
1测定土壤及植物水状况
(1)按照Barrs和Weatherley(1962)的方发测定叶片RWC(相对含水量)。在DAP(开花后
的天数)分别为22,24,26和28时,每日10:00-11:00之间取样,每次取两片新近成熟的
叶片→称重→将样品浸入蒸馏水中,在室温下浸润4h→在80℃下烘干48小时并在植物材料焦
化前称重。(2)计算叶片的WC(自然含水量),其分母为叶片的鲜重。
(3)土壤WC的测定用传统的重量分析方法。在DAP为22,24,26和28时16:00从花盆的
中心取样→称湿重→80℃下烘干48小时。
Notice1RWC计算:RWC=(W-W)/(W-W)×100%
fdtd
2WC计算:WC=(W-W)/W×100%
fdf
W:叶片鲜重;
f
W:叶片干重;
d
W:叶片吸水饱和时的重量。
t
2酶粗提液的制备
为了测定CAT,POD和SOD,取叶片0.5g(f.wt)→于6ml,50mM冰冷的磷酸钠缓冲液(含
0.2mMEDTA,1%(w/v)聚吡咯烷酮,pH7.0),冰浴研磨→匀浆用4层纱布过滤→以每分钟
15000g,4℃,离心20min→取上清。上清液可用来测量酶活性(Zhang和Kirkham,1994)。
为了测定AP,DR,MR和GR,取叶片0.7g(f.wt)→于8ml,25mM冰冷的磷酸钠缓冲液(含
0.2mMEDTA,1%(w/v)聚吡咯烷酮,pH7.8),冰浴研磨→过滤匀浆→以每分钟18000g,4℃,
离心15min→取上清。上清液可用来测量酶活性(Cakmak,Strbac和Marschner,1993)。
试剂:磷酸钠缓冲液(含0.2mMEDTA,1%(w/v)聚吡咯烷酮,pH7.0)。
3酶活性的测定
所有的分光光度分析都使用HitachiU-2000型分光光度计。
3.1SOD总活性的测定按照Giannopolitis和Ries(1977)的方法略作修改(Chowdhury和
Choudhuri,1985;Zhangetal。,1995)。3ml反应混合液中含63μM的NTB,1.3μM的核黄素,
13mM的蛋氨酸,0.1mM的EDTA,50mM的磷酸缓冲液(pH7.8)和20μL酶液。核黄素应最
后添加。将盛有反应混合液的试管放置在两盏4000lux荧光灯下,打开荧光灯,反应开始,照
光10min,关闭荧光灯,反应终止,马上测定它在560nm处的吸光度。不照光的反应体系在560nm
处的吸光度作为对照,并将之从A中减去。不加酶液的反应体系颜色最深,说明NTB被还原
560
量最大。NTB的光还原量与SOD的活性呈反比。SOD酶活性采用抑制NBT光还原50%为一个
酶活单位。
Notice:不加酶液的反应体系,以缓冲液代替酶液,其560nm处的吸光度作空白。
试剂:63μM的NTB,1.3μM的核黄素,13mM的蛋氨酸,0.1mM的EDTA,50mM的磷酸缓
冲液(pH7.8)
试剂:NTB,核黄素,蛋氨酸,EDTA,磷酸缓冲液(pH7.8)
3.2CAT与愈创木酚POD活性按照Chance和Machly的方法测定(1955)。对CAT来说,其活
性可以根据反应混合液1min内在240nm处的吸光度随着HO的分解而降低程度来确定(ε
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