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不飞则已，一飞冲天；不鸣则已，一鸣惊人。——《韩非子》

实验一蔗糖酶活力测定

一、目的要求了解蔗糖酶的性质及3,5–二硝基水杨酸比色法测定蔗糖酶活力的实验原理，

熟练掌握其测定方法。

二、实验原理

蔗糖酶（sucrase,EC3.2.1.26）又称转化酶，蔗糖在其作用下，水解为D–葡萄糖与D–果糖。

酵母细胞含丰富的蔗糖酶（胞内酶），细胞破壁后释放出来的蔗糖酶可以从果糖末端切开蔗糖的

果糖糖苷键，使蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，葡萄糖和果糖是还原糖，其含量可通过3,5–二硝

基水杨酸比色法测定，从而度量酶活力的大小。

蔗糖酶活力定义为：在35℃实验缓冲液条件下，每3min释放1mg还原糖的酶量为1酶活

单位。由于蔗糖酶在碱性条件下极易失活，所以可用碱终止酶解反应。

3,5–二硝基水杨酸定糖法实验原理：利用3,5–二硝基水杨酸溶液和还原糖溶液共热后被还

原成棕红色的氨基化合物，在520nm波长处有最大吸收峰，在一定范围内其吸光度与还原糖含

量呈线性关系，可用于还原糖含量测定。

三、试剂和仪器

（一）试剂

1、3,5–二硝基水杨酸试剂（DNS）。

甲液：溶解6.9g结晶酚于15.2mL10%NaOH，并用水稀释至69mL，在此溶液中加6.9g

NaHSO。

3

乙液：称取255g酒石酸钾钠置于300mL10%NaOH中，再加入880mL1%3,5–二硝基水

杨酸溶液。

将甲、乙两溶液混合即得到颜色呈黄色的使用液，贮于棕色瓶中，室温下放置7–10天后使

用。

1、葡萄糖标准使用液（1mg/mL）：称取干燥的葡萄糖0.1000g，溶于水并定溶至100mL。

2、5%蔗糖溶液：称取5.00g蔗糖用pH5.50.1mol/L醋酸-醋酸钠缓冲溶液配置成100

mL。

3、1mol/LNaOH。

不飞则已，一飞冲天；不鸣则已，一鸣惊人。——《韩非子》

(二)仪器

1、电热恒温水浴锅。

2、721分光光度计。

1、秒表或手表。

四、操作方法

1、标准曲线制备

试管号012345

葡萄糖标准

00.150.30.450.600.75

溶液(mL)

葡萄糖含量00.150.30.450.600.75

（mg）

水(mL)1.00.850.700.550.400.25

DNS试剂（mL)

1.51.51.51.51.51.5

摇匀，于沸水浴中加热5min，迅速冷却，加水定容至25mL

A

520nm

使用1cm比色皿，在520nm波长条件下，以试剂空白条零，测定各管吸光值。

用坐标纸