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高效液相色谱法测定黑莓汁和黑莓果酒中常

见有机酸

作者：梁红云王英董明盛

来源：《江苏农业科学》2016年第07期

摘要：采用高效液相色谱法测定黑莓汁和黑莓果酒中有机酸含量。采用美国AgilentSB-

C18（4.6mm×150mm，5μm）为分析柱；流动相：0.5%（NH4）2HPO4-H3PO4缓冲液（磷

酸调pH值为2.0）；温度：30℃；流速：1.0mL/min；检测波长：214nm；进样量：20μL。

建立了检测黑莓果酒中主要的6种有机酸（酒石酸、L-苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、D-苹果

酸）的高效液相色谱方法。该方法的回收率为98.56%；RSD（相对标准偏差）为0.21%。

关键词：高效液相色谱法；黑莓汁；黑莓果酒；有机酸

中图分类号：O657.7+2文献标志码：A文章编号：1002-1302（2016）07-0327-03

黑莓（blackberry）属于蔷薇科（Rosaceae）悬钩子属小灌木Rubuslaciniata的果实，是一

种具有较强抗氧化能力的小浆果，美国农业部评价结果显示黑莓的抗氧化能力居第二位[1]。

黑莓除含有糖、多种有机酸、膳食纤维、维生素和矿物质外，还含有大量的多酚、花青素、鞣

花酸等具有抗氧化功能的成分[2-4]。我国黑莓的主栽品种有Hull、Chester、Boysen等，江

苏、东北、贵州等地是我国主要的黑莓种植地区，总种植面积约1万hm2，全国黑莓年总产量

约20万t。黑莓果实柔嫩多汁，营养丰富，富含锌、硒等多种矿物质，氨基酸种类齐全，且花

色苷和总酚含量较高，被誉为第三代“黄金水果”，所含有的多酚类化合物在体内发挥抗氧化作

用，可以降低心脏病、癌症和其他慢性病的发生率[3-4]。

糖和有机酸是食品中重要的风味成分。Türemi

瘙塂等研究了9种黑莓的糖酸比，结果发现黑莓最高的糖酸比（可溶性固形物含量/总

酸）为9.6[5]。Wrolstad等采用气相色谱检测美国和英国多种黑莓中的有机酸，包括苹果酸、

柠檬酸、莽草酸、异柠檬酸、奎宁酸和磷酸等，其中异柠檬酸是所有黑莓中含量最高的有机酸

[6]。Kafkas等检测了土耳其黑莓中的有机酸含量，在所研究的5种黑莓中，苹果酸是含量最

高的酸，而柠檬酸的含量均为零[7]。糖和酸的比例（糖酸比）常被用来判断果实是否成熟和

消费者的接受程度。如果是鲜食的品种，一定要保持适当的糖酸比。随着成熟度的增加，黑莓

中可溶性固形物的含量增加，有机酸的含量减少。

植物体内有机酸含量分析是近几年来研究的热点，尤其是在逆境生理方面。果实中有机酸

种类与含量也是衡量果实品质的重要指标。目前测定有机酸的方法通常包括气相色谱法、高效

液相色谱法和离子色谱法，其中气相色谱法（GC）测定有机酸时，常常因为酸的沸点较高、

不易气化而需要先对其衍生再进行测定，方法比较繁琐；离子色谱法（HPIC）是近来应用较

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多的测定植物体内有机酸的方法[8-9]，可以同时测定溶液中的有机酸根离子和无机阴离子，如

NO-3、Cl-、PO43-等，并且样品前处理简单[10-12]，但大量无机阴离子的存在通常增加了低

含量有机酸的检测难度；与之相比较，高效液相色谱法（HPLC）测定有机酸的方法比GC法

简单[13-14]，但也存在pH值、流动相的选择等方面的问题，尤其是在测定几种以上的有机酸

时更为明显。

对于黑莓果酒而言，同时检测多种有机酸是必须的，因为有机酸的组成和比例更直接地影

响着黑莓果酒风味的优雅和谐，但由于黑莓果酒组分复杂，乙醇、色素、多酚以及糖等组分都

可能对有机酸的检测造成干扰，因此，有必要建立一种稳定的、适于黑莓果酒多种有机酸分析

的快速方法。

材料1与方法

材料1.1

黑莓果酒：江苏省农业科学院农产品加工研究所酿造的黑莓果酒，黑莓品种为宝森，采自

南京溧水地区。

仪器1.2与试剂

仪器：PHS-3C型pH值计（上海精密科学仪器有限公司）；Waters2695-2998高效液相色

谱仪（美国Waters公司），配有DAD检测器、色谱柱恒温箱和自动进样器；有机相针式过滤

器。

试剂：