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以家为家，以乡为乡，以国为国，以天下为天下。——《管子》

PCR扩增过程中污染的预防与对策

第一篇：PCR扩增过程中污染的预防与对策

pcr技术是聚合酶链反应，该技术可将极微量的靶dna特异的扩

增上百万倍，从而大大提高对dna分子的分析和检测能力。pcr反应

的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，操作复杂，所以在

其操作过程中常有污染发生，即使极少量的污染也会造成假阳性，稍

有差错就会出现假阴性。

本文讨论pcr扩增过程中污染的预防与对策。操作者必须熟练掌

握技术，严格按操作规程操作，防止假阳性、假阴性结果的产生。

污染的原因调查

标本间的污染；采集标本的容器被污染；提取过程中加样枪污染；

试剂的污染；提取过程中气溶胶的污染等。

防止污染的预防与对策

实验人员要熟练掌握pcr操作技术，严格规范操作程序，操作过

程中加样枪的使用，手套、枪头、离心管应一次性使用。严格按试剂

生产厂家提供的程序进行操作。

严把质量关，在操作当中总结，马上到期的试剂或刚过期试剂对

pcr结果影响很大。

设立阴性质控和阳性质控：阴性质控以监测试剂是否污染，阳性

质控以监测pcr反应是否成功，产物大小是否合本理论要求。

实验室设置及设备的规范化

实验室划分为4区：试剂准备区、，标本准备区、pcr循环扩增区、

检测区。扩增仪的设置要符合要求，取样器刻度准确，减少pcr循环

次数，只要pcr产物过剩检测水。

近年来pcr技术已普及到各基层医院，广泛地用于感染性病原体，

如hbvhcv的临床检测，由于缺乏对核酸扩增检验技术完整的了解以

及缺乏质量保证措施，导致部分实验室结果出现假阳性、假阴性的出

现，所以操作者必须熟练掌握技术，严格按操作规程操作，防止假阳

性，假阴性结果的产生。

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第二篇：16sRNAPCR扩增及凝胶电泳分析实验报告

16sRNAPCR扩增及凝胶电泳分析

微生物学王紫枫

一、实验目的1．熟悉细菌活化及培养过程

2．掌握PCR扩增技术及方法

3．掌握凝胶电泳分析技术

二、实验原理

rRNA进化缓慢，具有高度保守性。不同微生物的rRNA的基因序

列在某些位点以不同的几率发生突变。同时，小核糖体亚基16sRNA

分子量大，携带信息量大，可作为属种鉴定的基础。

通过筛选的细菌，做活化培养后，细菌在缓冲液酶解，通过细胞

破壁、裂解、离心得到RNA相关序列，在经过设定PCR相关条件。

温度、循环次数，将裂解液加入到体系中进行扩增。在完成循环后进

行凝胶电泳、拍照、序列分析。

三、实验用品

供试菌种53种、编号试管每株两个LB固体和液体培养基、Mg2+、

无菌水、EBBuffer、TE离心管、移液枪

四、实验步骤