解淀粉芽孢杆菌添加前体物发酵法生产抗病毒药物利巴韦林的生产工艺.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN103146785A

(43)申请公布日2013.06.12

(21)申请号CN201310097836.3

(22)申请日2013.03.25

(71)申请人天津科技大学

地址300457天津市塘沽区泰达开发区13大街29号03信箱

(72)发明人陈宁马跃超刘莉徐庆阳谢希贤张成林

(74)专利代理机构天津佳盟知识产权代理有限公司

代理人侯力

(51)Int.CI

C12P19/28

C12N15/75

C12N1/21

C12R1/07

C12R1/125

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

解淀粉芽孢杆菌添加前体物发酵法

生产抗病毒药物利巴韦林的生产工艺

(57)摘要

一种解淀粉芽孢杆菌添加前体物

TCA（1,2,4-三氮唑-3-羧甲酰胺）发酵法生

产抗病毒药物利巴韦林的生产工艺。本发

明首先构建了一个能在解淀粉芽孢杆菌细

胞内稳定复制并高效分泌表达嘌呤核苷磷

酸化酶（PNPase）的重组质粒pBSA43-

Bs816PNP，并将此质粒转化鸟苷生产菌解

淀粉芽孢杆菌TA208，得到一株兼具高效

生产鸟苷和高效表达嘌呤核苷磷酸化酶这

两种特点基因工程菌

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

2021-03-12未缴年费专利权终止未缴年费专利权终止

2014-05-21授权授权

2013-07-17实质审查的生效实质审查的生效

2013-06-12公开公开

权利要求说明书

1.一种解淀粉芽孢杆菌添加前体物TCA（1,2,4-三氮唑-3-羧甲酰胺）发酵法生产抗

病毒药物利巴韦林的生产工艺，即利用自行构建的兼具高效生产核

苷和高效表达嘌呤核苷磷酸化酶这两种特点的基因工程菌

RBVM（pBSA43-Bs816PNP）通过发酵过程中添加前体物TCA

实现发酵法生产利巴韦林，具体工艺包括：

A.利用分子生物学技术以鸟苷生产菌解淀粉芽孢杆菌TA208作为宿主菌构建兼具

高效表达嘌呤核苷磷酸化酶（PNPase）的基因工程菌RBVM

（pBSA43-Bs816PNP）：即利用PCR技术从枯草芽孢杆菌BS168

中扩增低分子量嘌呤核苷磷酸化酶编码基因pupG，与经过改造的表

达载体pBSA43连接，构建了具有较高表达效率和很高质粒稳定性的分泌型表达载

体pBSA43-Bs816PNP和工程菌RBVM（pBSA43-Bs816PNP）；

B.工程菌添加前体物发酵：将步骤A中获得的经扩大培养的菌种RBVM

（pBSA43-Bs816PNP）接入发酵培养基进行工程菌添加前体物发酵，发酵

培养基中碳源含量应为8%～12%，氮碳比N:C应介于10：

100～15：100之间，无机盐含量应为0.1%～12%