猪瘟活疫苗的制备方法及其产品 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN102294029A

(43)申请公布日2011.12.28

(21)申请号CN201010536418.6

(22)申请日2010.11.09

(71)申请人北京华威特生物科技有限公司

地址100085中国北京市海淀区开拓路5号B区三层B302室

(72)发明人武华夏铭崎张淑琴

(74)专利代理机构北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司

代理人孙皓晨

(51)Int.CI

A61K39/187

C12N7/08

A61P31/14

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

猪瘟活疫苗的制备方法及其产品

(57)摘要

本发明公开了猪瘟活疫苗的制备方

法及其产品，其制备方法包括：(1)培养猪

源传代细胞系；(2)将猪瘟活疫苗生产种毒

接种猪源传代细胞系，得到猪瘟弱毒疫苗

株；(3)将猪瘟弱毒疫苗株进行病毒增殖；

(4)采用免疫荧光方法测定增殖病毒悬液的

毒价；(5)向检测合格后的病毒液中加入冻

干保护剂和抗生素进行配苗、冷冻干燥。

本发明用细胞系生产猪瘟活疫苗，各批间

质量差异小，具有工艺简单稳定、易操

作、产量大、成本低等特点，具备工业化

大生产的可行性和可放大性。此外，本发

明采用免疫荧光方法测定增殖病毒悬液的

毒价，检测敏感，快速，特异，准确，重

复性高，结果可靠。本发明所制备猪瘟活

疫苗对猪瘟强毒攻击可100％保护。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种猪瘟活疫苗的制备方法，包括以下步骤：(1)、培养猪源传代细胞系；(2)、

将猪瘟活疫苗生产种毒接种培养好的猪源传代细胞系，筛选得到猪瘟弱毒疫苗株；

(3)、将猪瘟弱毒疫苗株进行病毒增殖；(4)、采用免疫荧光方法测定增殖病毒悬液

的毒价；(5)、向检测合格后的病毒液中加入冻干保护剂和抗生素进行配苗、冷冻

干燥，即得。

2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的猪源传代细胞系的

培养方式为单层贴壁培养、悬浮培养或固定化培养。

3.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的猪源传代细胞系

包括但不限于：PT细胞系、MPK细胞系、SK6细胞系、PK2a细胞系、CPK细胞

系、RKC细胞系、MDBK细胞系、MDCK细胞系、CRFK细胞系、Vero/slam细胞

系、Vero-E6细胞系、Marc-145细胞系、BHK细胞系、BGM细胞系或DK细胞系。

4.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述猪瘟弱毒疫苗株的

微生物保藏号是：CGMCCNo.3891。

5.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中将猪瘟活疫苗生产种毒

以感染剂量0.1-0.5接种到培养好的猪源传代细胞系上进行培养。

6.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中将猪瘟活疫苗生产种毒

以感染剂量0.1-0.5接种到培养好的猪源传代细胞系上进行培养，接种5日作第一

次收获换液，以后每隔4日收获换液，收获不超过5次。

7.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中采用免疫荧光方法测定

增殖病毒的毒价时，所采用的单克隆抗体为抗猪瘟病毒单克隆抗体；所采用的荧光

标记物为FITC或IPMA；所用到的固定液为预冷的80％丙酮、10％甲醛或75％乙

醇。

8.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中采用免疫荧光方法测定

增殖病毒的毒价时，其步骤包括：(1)细胞传代，准备细胞培养板：选取生长良好

的猪源传代细胞系，经胰酶-EDTA消化后，加入细胞生长液制备细胞悬液，应用

台盼兰