猪FcγRⅢ和γ链共转染Marc-145细胞系的建立 .pdfVIP

猪FcγRⅢ和γ链共转染Marc-145细胞系的建立

邬成业;史平玲;乔松林;王爱萍;郝慧芳;杜晓明;王林林;张改平

【摘要】为了建立稳定表达猪FcγRⅢ(PorcineFcgammareceptor

Ⅲ,poFcγRⅢ)的Marc-145细胞系,从PAM细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技

术获得猪FcγRⅢ和γ链的cDNA,并构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅢ真

核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300mg/L)和G418(400

mg/L)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环试验和流

式细胞术对细胞系进行了鉴定.结果表明,成功构建了猪FcγRⅢ和γ链真核表达载

体,建立了稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系,表达于转染细胞表面的猪FcγRⅢ受体分子

能与猪IgG特异结合.%Theobjectiveofthepresentstudyistoestablishthe

Marc-145celllinethatstablyexpressesporcinepoFcΥRⅢ(porcineFc

gammareceptorⅢ,poFcΥRⅢ).ThetotalRNAwasextractedfromporcine

alveolarmacrophage(PAM),andpoFcΥRⅢandΥ-chaincDNAswere

clonedbyRT-PCR,thentheywereinsertedintotheeukaryoticexpression

vectorspcDNA3.1(+)andPIREShyg3respectively.Themarc-145cellline

wasstablytransfectedwithpcDNA3.l-poFcΥRⅢandPIREShyg3-Υplasmids

byLipofectamine2OOO,thentheco-transfectedcellswereselectedby

HygromycinB(300mg/L)andG418(400mg/L).TheexpressionofpoFcΥRⅢ

ontransfectedcellswasverifiedthroughRT-PCR,rosettingtestandFCM.

Theeukaryoticexpressionvectorsweresuccessfullyconstructedandthe

Marc-145celllinewithstablepoFcΥRⅢexpressionwasobtained.The

Marc-145celltransfectedwiththepoFcΥRⅢcDNAwereabletobind

porcineIgG.

【期刊名称】《华北农学报》

【年(卷),期】2011(026)001

【总页数】5页(P6-10)

【关键词】猪FcγRⅢ受体;γ链;共转染;Marc145细胞

【作者】邬成业;史平玲;乔松林;王爱萍;郝慧芳;杜晓明;王林林;张改平

【作者单位】河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,河南省动物免

疫学重点实验室,河南,郑州,450002;郑州大学,生物工程系,河南,郑州,450001;河南

省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,河南省动物免疫学重点实验室,河

南,郑州,450002;郑州大学,生物工程系,河南,郑州,450001;河南省农业科学院,农业

部动物免疫学重点开放实验室,河南省动物免疫学重点实验室,河南,郑州,450002;郑

州大学,生物工程系,河南,郑州,450001;郑州大学,生物工程系,河南,郑州,450001;河

南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,河南省动物免疫学重点实验室,

河南,郑州,450002

【正文语种】中文

【中图分类】Q78

Fc受体(FcR)是特异亲和免疫球蛋白(Ig)Fc片段的细胞表面分子，广泛表达于效应

细胞和免疫辅助细胞表面。Fc受体介导免疫细胞与抗原抗体复合物及其他细胞间

的相互作用，是体液免疫与细胞免疫间的桥梁。目前发现的FcR