《转基因食品与安全》第5章转基因食品的检测和分析.pptx

第五章转基因食品的检测和分析;检测主要针对其中的DNA、蛋白质或脂肪酸等成分。

基于DNA的检测方法可分为两类：;第一节转基因阳性个体的分子鉴定;PCR;2.程序

提取待测样品DNA设计引物、进行PCR

PCR产物凝胶电泳检测;大多数转基因作物的启动子是CaMV35s，来自花椰菜花叶病毒DNA，终止子为Nos，来自植物细菌，PCR检测是对启动子、终止子的检测。

（3）琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物。

扩增条带的分子量与理论上应产生的分子量相同，则说明被检测对象的基因组中含有外源基因。;例如：转基因棉花选择标记基因NPTII编码区段的PCR扩增结果（M为分子量标准，C为非转基因植株，P为质粒对照，1-20为转基因植株）;（二）定量PCR法;二、斑点印迹法;概念：;三、Southern杂交;Southern印迹杂交（Southernblot）是1975年由英国人southern创建，是研究DNA图谱的基本技术，在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。

;电泳;1975E.M.Southern;;第二节外源基因的表达;Northern印迹杂交（Northernblot）。是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。

DNA印迹技术由Southern于1975年创建，称为Southern印迹技术，RNA印迹技术正好与DNA相对应，故被称为Northern印迹杂交，与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Westernblot。;Northern杂交是一种RNA-DNA杂交。

将提取的植物总RNA或mRNA用变性凝胶电泳分离，则不同的RNA分子将按分子量大小依次排布在凝胶上；

将它们原位转移到固相膜上；在适宜的离子强度及温度条件下，用探针与膜杂交；

然后通过探针的标记性检出杂交体。;（二）RT－PCR

RT-PCR为反转录RCR或实时PCR共同的缩写，是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。

;二、翻译水平的检测;;抗体（Antibody，Ab）：

是高等动物体在抗原刺激下产生的一类能与抗原特异结合的活性物质。

抗体具有双重性（它既是抗体又是抗原），即抗体又可以作为抗原。

一种抗体作为抗原刺激机体产生的新抗体叫抗抗体。;Western杂交;2.ELISA法（酶联免疫吸附法）;间接免疫吸附测定法：;;酶联免疫吸附法（ELISA）;样品中土霉素的ELISA检测;（二）生物化学性质和生物学活性分析;转基因棉花饲喂棉铃虫时被食用情况（左图为转基因抗虫棉，右图为非转基因棉）;第三节基因芯片技术;传统的转基因食品检测方法;传统的转基因食品检测方法的缺点;生物芯片（biochip）;生物芯片的种类;所有的生物芯片技术都包含四个基本要点：芯片的制作、杂交或反应、测定或扫描、数据处理。生物芯片的技术核心是芯片的制备及反应信号的检测。;基因芯片;基因芯片检测原理;转基因食品的检测：;特点：

机械化程度高，检测结果准确可靠，但检测成本高，对技术要求较高。

该技术在转基因食品检测中有广阔的前景。;Western杂交原理