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组织培养

基本技术与基本知识

2005.10.15

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目录

前言

第一章基本技术

第一节原代细胞单层静止培养的设备与器材准备

一、设备与器材

二、器材的清洗

第二节原代细胞单层旋转瓶培养的设备与器材准备11

一、设备与器材

二、器材的清洗

第三节组织培养用水的制备和各种溶液的配制

一、水（双蒸水、三蒸水或去离子水）

二、汉克氏（Hanks）原液和汉克氏液

三、0.5%水解乳蛋白汉克氏液（简称乳汉液）的配制

四、7.5%的碳酸氢钠（NaHCO）配制

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五、胰蛋白酶的配制

六、犊牛血清的制备

七、每毫升含1万单位双抗（青霉素与链霉素）的配制

八、每毫升5万单位制霉菌素的配制

九、营养液与维液的配制

第四节器物与溶液的包装、灭菌和无菌操作

一、包装与灭菌

二、无菌操作

第五节无菌检验

第六节原代单层细胞的制备

第七节细胞计数和染色

一、细胞计数

二、细胞染色

第八节培养细胞的观察

一、培养细胞的生长和繁殖

二、在单层细胞培养中细胞的形态观察

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第九节原代单层细胞培养中应注意的问题

一、应注意的问题

二、可能会出现的问题

第二章在组织培养的细胞中病毒的接种与毒价的滴定（测定）31

第一节在组织培养的细胞上病毒的接种方法

一、用敏感细胞分离病毒

二、病毒在敏感细胞中的传代

三、接种后细胞病变（CPE）的观察与判定标准

第二节在组织培养细胞中病毒毒价的测定

一、病毒毒价测定操作方法

二、半数细胞病变终点（TCID）计算

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第三章基本知识

第一节影响离体细胞生长繁殖的一些因素

一、温度

二、氢离子浓度

三、水

四、渗透压与无机盐类

A、细胞所需无机盐离子的作用

B、无机盐类对平衡渗透压和维持pH的作用

五、气体

六、细胞接种浓度

七、容器转动速度

第二节细胞的营养物质

一、碳水化合物

二、氨基酸和水解乳白蛋白

三、血清

（一）、血清的作用

（二）、与血清有关的几个问题

四、维生素

第三节消化液的应用

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一、胰蛋白酶

二、乙烯二胺四乙酸（Versene，EDTA）

三、胶原酶

四、Pronase

第四节抗菌素的应用

一、青霉素

二、链霉素

第五节传代细胞与细胞悬浮培养

一、传代细胞

二、细胞悬浮培养

第四章附录

附录Ⅰ猪瘟兔化弱毒细胞冻干疫苗（旋转瓶培养）制造及检验办法65

附录Ⅱ禽苗的鸡胚细胞苗试制67

附录Ⅲ应用驴胎肺等二倍体细胞生产马传染性贫血病琼脂扩散反应抗原操作方法—68

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前言

为了适应我国畜牧业的发展，防止各种畜、禽流行病的爆发和流行，需要生产大量的家

畜家禽的各种疫苗，而目前不少疫苗的生产尚未探取组织培养的方法，存在着成本高，费人

力，劳动强度大，有些疫苗的原料比较难于得到或需要耗费较多的家畜或家禽，例如狂犬疫

苗的生产，目前还是采用绵羊的脑子来制造，一只羊只有脑子能利用。因此，国内有不少兽

医生物制品厂和研究单位已探取组织培养的方法生产各种疫苗。例如：猪瘟疫苗的生产，原

采用乳兔和黄牛进行生产，而现在已推广仔猪肾细胞组织培养方法生产，一对仔猪肾所生产

的苗就相当于以前500—1000只乳兔或30—40头黄牛所生产的量，这不仅使成本成倍的下降，

原料易得，节省了人力，而且使劳动强度大大减轻。除此之外，口蹄疫甲型和乙型的组培灭

能苗和甲型组培弱毒苗已进行试生产，猪水泡病的组培弱毒苗与组培反映苗也正在进行试制。

鸡马力克氏病和新城疫Ⅰ系和Ⅱ系组培苗许多单位在进行试验，并已取得可喜成果。另外如

鸭瘟、