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液相操作

1.进实验室后，门不要关死，将靠窗的强力排风扇开启，此时窗户应该关闭，以便排出空

气中的残留溶剂。

2.排气约15min后，关闭排气扇，稍微打开旁边的窗户，关上门，把门旁边的排气扇打开。

3.开启高压泵、柱温箱以及检测器（检测器可能需要开关两次）、电脑（密码：307），检

查瓶中的溶剂是否充足，不够的补足至瓶颈处，实验过程中随时关注瓶中溶剂，不能少

于1/3。柱温箱的温度按照文献值设置，一般为28-32℃，最高不超过35℃。

4.如有必要，开启空调，室温置于26℃。

5.分别拧开两个高压泵上的“purge”阀，摁输液泵右上角的“local/remote”键将其切换至

“local”模式，此时可通过控制面板操作高压泵，摁“mode”将其切换至“iso”等度洗

脱模式，按各自操作面板上的“purge”键，冲洗3min。按“stop”键关闭输液泵，拧紧

“purge”阀，再摁“mode”将其切换至“gra”梯度洗脱模式；摁“local/remote”键将

其切换至“remote”模式，此时可通过电脑远程操作高压输液泵。

6.紫外检测器自检通过后，摁面板右上角的“local/remote”键将其切换至“remote”模式，

通过电脑远程操作紫外检测器。在波长设置一栏输入参考文献波长（或通过测紫外吸收，

填入最大吸收波长），点“set”；积分时间一般输入0.1s，点“set”。其余不用设置，点

左边的”start”,则出现色谱工作站界面。

7.在梯度程序下面选择一行，点修改，可以输入需要的流动相比例，以及流速。一般正己

烷：异丙醇=90:10,保存柱子，调整在其附近调整。或者按照文献比例设置。先进样外消

旋体确定每一个组分的保留时间，再进样进行对比。

8.流动相要求：所有流动相必须经0.22um微孔滤膜过滤。

9.样品处理：用异丙醇溶解，经微孔滤膜过滤，再进行稀释后进样，尝试阶段应该进样稀

释后的样品，防止浓度过大，在柱子上残留。进样量一般控制在15-20ul。（只是测ee

值的话）

10.实验完毕，应以比实验所用流动相极性大的流动相比例进行冲洗柱色谱约20min（如实

验用90：10，冲柱时候可以使用80：20），等极性大的残留在柱子上的杂质冲洗出来后，

再恢复到正己烷：异丙醇=90：10，约20min，保存柱子。

11.冲洗完毕，点控制面板里的“stop”，停泵，待输液泵上显示的系统压力为0.00MPa；点

控制面板上的“氘灯”，关闭氘灯；至此可以在数据整理完毕后关闭电脑软件及电脑。

12.关闭高压输液泵、紫外检测器、柱温箱的开关，等仪器稍微散热后，关闭插座电源，盖

上防尘布。

13.离开实验室之前将空调、门窗关好，电源及其排气扇关好；整理好台面，将需要回收的

样品及相应的垃圾带走，检查所剩溶剂的量，不够的话下次要记得带。

14.做液相前要带的东西：样品，不够的流动相（正己烷用量大，需注意），标签纸（可提

前剪好），笔，笔记本，离心管（5ml的用来装溶剂，1.5ml的用来稀释样品），滤膜，

注射器等。