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液相使用流程

总介：液相色谱仪，就是将样品物质溶解后，通过流动相，在高压泵的作用下，

通过固定相色谱柱，将样品物质分离开，依次通过检测器，再输出到显示界

面，得到色谱分析的结果。

1.实验开始前

（1）首先拿到方案（可能方法开发或者日常检测拿到手的是方法）后，先要核

对方案或方法是否有明显的错误，如配样方法有无和已知的存在出入等；

（2）其次是看液相色谱方法：

1）色谱柱：确认色谱柱型号，然后找到色谱柱，如果没找到该型号色谱柱，

去液相外电脑室中，office001目录下D盘中，找到色谱柱的台账（具体文件夹

目录忘记了我），在台账中查看是否有此色谱柱，如果没有或者台账显示有但实

际未找到，向上级报告，及时购买等；如果找到该型号色谱柱，先观察包装盒上

是否标识有损坏或者反接字样（由于色谱柱接装有制定的前后顺序，如提示反接

就按照相反方向接装色谱柱），打开后先查看包装盒中的色谱柱使用记录，查看

上一次使用时间距离现在有多久，如果能找到上一次使用的人员，就询问下此色

谱柱是否有异常等；

2）确认该色谱方法，是否需要控制样品温度，由于只有部分仪器装有样品

室控温模块，如果检测样品在待测过程中，需要保持低温状态的，则需要协调仪

器拿到拥有控温模块的仪器；

3）确认该色谱方法，是否需要DAD检测器。实验室目前的仪器只有两三台

是拥有DAD检测器，其余均为VWD检测器。所谓DAD检测器和VWD检测

器之间的区别，简单理解就是DAD拥有所有紫外波长同时检测的功能，而VWD

每次只能检测一个波长，DAD通常是用来进行方法开发确定在紫外吸收波段中，

待测物质在哪个紫外波长的吸收最大，就和理化做紫外检测全波段扫面一样，同

时也可以用来确定结果色谱峰的纯度。

4）在确认色谱方法后，也要注意洗脱程序类别；

洗脱程序有等度洗脱和梯度洗脱，等度洗脱指的是，整个色谱分析过程中，

流动相按照初始比例和流速保持不变的洗脱程序；梯度洗脱程序指的是在分析过

程中，流动相比例和（或）流速随着时间的改变发生变化的洗脱程序；

（3）然后是看所需的标准品和样品，

标准品需要去查看台账剩余量，和方法中所需要的量要核对，同时核对标准

品是否过期，同时也要注意标准品的含量有多少（像我们验证，在称量时，如果

标准品含量太低，会通过适当增加称样量的方法，来补偿含量偏低带来的有效成

分损失）

样品由于验证和方法开发、日常检测不一样，所以按照后两者的所需要求

来处理和保存等。

（4）还有就是看样品配置过程，看所需的容量瓶和移液管是否有库存，如果没

有，就及时提早清洗，防止要配样了发现没容量瓶等玻璃器具。

2.实验过程中

（1）先检查液相仪器是否在校验有效期内（在液相侧面的牌子上，一般看过一

次心里有数就行）、指示灯是否异常（主要是是否有亮红灯)、软件和仪器是否连

接正常、仪器使用记录上一位分析员的使用记录填写是否正常、底下废液瓶中的

废液是否溢满等；

（2）其次是查看C、D通道的乙腈和水是否过期，如果过期，则及时更换，其

中水的有效期是当天，乙腈有效期是15天（这里简单说明下，液相流动相一共

有四个通道，分别是A、B、C、D，也就是说一次总共可以同时使用4种试剂作

为流动相，但我们实验室有规定，无特殊情况，A通道专门用来使用缓冲盐，B

用来使用乙腈或者甲醇等有机溶剂，C用来放乙腈，D用来放水，C、D两个通

道主要是用来在实验结束后的清洗保存色谱柱。色谱柱在实验结束后，一般先用

低比例的乙腈冲洗一段时间，再缓慢梯度变化到高比例的乙腈保存；至于为什么

A通道时缓冲盐，B通道时有机溶剂，主要是与液相的构造有关，先不赘述，到

时候对着仪器再讲解更容易理解）

（3）然后是装色谱柱，过程中，需要注意色谱柱的安装方向，一般色谱柱柱体

上都有箭头，箭头指向的方向是检测器，液相液体的流动方向是：溶剂瓶→泵→

色谱柱→检测器→废液瓶，因此按照这个顺序，比对柱体上的箭头安装，安装时

注意接口处旋钮的松紧程度，这个需要实践多练习才能找到松紧的掌握关键，在

刚开始接触液相，可以于正式开始检测序列前，打开柱温箱用滤纸接触连接处查

看是否有漏夜，虽然仪器也有漏夜警报装置，但能避免就尽量避免，而且有些小

的漏夜可能警报装置无法及时反馈；

（4）装好色谱柱后，先用乙腈/水=20/80的比例，用0.3mL/min的低流速对