雨生红球藻中虾青素的C30-反相高效液相色谱法测定 .pdfVIP

雨生红球藻中虾青素的C30-反相高效液相色谱法测定

孙伟红;肖荣辉;冷凯良;邢丽红;苗均魁;许洋;王泽文

【摘要】建立了雨生红球藻中虾青素的C30-反相高效液相色谱测定方法.雨生红

球藻经二氯甲烷-甲醇(体积比25:75)研磨和超声提取后,在0.5mL0.1mol/L

NaOH甲醇溶液中于5℃避光皂化12h,在YMC-CaarotenoidC30色谱柱(250

mm×4.6mm×5μm)上以甲醇(A)、叔丁基甲基醚(B)、1%磷酸溶液(C)为流动相

梯度洗脱,采用紫外检测器在474nm测定.在优化实验条件下,雨生红球藻中的虾青

素酯可以很好地转化为游离虾青素.实验以虾青素酯和虾青素在C30色谱柱上不同

的出峰时间作为判断是否皂化完全的依据.在0.1～5mg·L-1时峰强度与虾青素质

量浓度呈良好线性(r=0.9997),方法的定量下限为2mg/kg,平均回收率为95%～

108%,相对标准偏差为3.5%～14.7%.方法准确可靠,适用于雨生红球藻中虾青素

含量的测定.

【期刊名称】《分析测试学报》

【年(卷),期】2010(029)008

【总页数】5页(P841-845)

【关键词】雨生红球藻;虾青素;皂化法;C30-反相高效液相色谱法

【作者】孙伟红;肖荣辉;冷凯良;邢丽红;苗均魁;许洋;王泽文

【作者单位】中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;中国海洋大

学食品科学与工程学院,山东,青岛,266100;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山

东,青岛,266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;中国水产

科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;中国水产科学研究院黄海水产研究

所,山东,青岛,266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;中国

水产科学研究院黄海水产研究所,山东,青岛,266071;中国海洋大学食品科学与工程

学院,山东,青岛,266100

【正文语种】中文

【中图分类】O657.72

虾青素(Astaxanthin,3，3′-二羟基-4，4′-二酮基-β，β′-胡萝卜素)是一种类胡

萝卜素衍生物,具有很强的抑制肿瘤发生和生长,抑制多元不饱和脂肪酸的氧化,抵

御紫外线,增强人体免疫功能,改善视力、色素形成和神经连通以及改善生育等作用,

同时还有清除二氧化氮、硫化物、二硫化物和降低脂质过氧化的作用[1-4],因此在

化妆品、保健品和医药中具有广泛的应用前景。游离的虾青素主要有3种同分异

构体:trans-astaxanthin、9-cis-astaxanthin、13-cis-astaxanthin,目前国内报道

的虾青素的分析方法通常为高效液相色谱法,且一般只分析trans-astaxanthin[5-

11]。美国食品药品监督管理局(FDA)规定了雨生红球藻中总虾青素测定的分光光

度法[12]。除了碱皂化法转化虾青素酯为游离的虾青素外,亦有文献采用胆固醇酯

酶转化胡萝卜素酯[13];日本FUJI化学工业集团建立了分光光度法和高效液相色谱

法测定雨生红球藻中虾青素含量的方法[14],该方法采用胆固醇酯酶转化雨生红球

藻中的虾青素酯,并采用C30反相色谱柱测定了虾青素的3种同分异构体的含量,

但成本昂贵。本文采用C30-反相高效液相色谱NaOH皂化法测定了雨生红球藻

中trans-astaxanthin、9-cis-astaxanthin、13-cis-astaxanthin的含量,并对不

同厂家生产的不同批次的雨生红球藻成品进行了验证。

1.1仪器与试剂

美国Agilent1100高效液相色谱仪,配紫外检测器;MilliporeQ超纯水器(美国

Millipore公司);HimacCR22G高速冷冻离心机(日本Hitachi公司),KQ-300E超

声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司);N-EVAP112氮吹仪(Organomation

Associates.jnc,USA);0.45μm滤膜;丙酮、甲醇、乙腈、二氯甲烷和叔丁基甲基醚

均为色谱纯;雨生红球藻样品分别购于国内外不同虾青素生产厂家。

虾青素标准品购于德国Dr.Ehrenstorfer公司,纯度为(95.8±0.5)%;准确称取适量

虾青素标准品,用二氯甲烷或丙酮配成1000