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猪瘟疫苗病毒荧光定量PCR检测方法的建立
李满;刘鑫宇;杨倩;于红欣;周双海
【摘要】[Objective]Inordertodevelopafluorescencequantitative(FQ-)
PCRmethodtoquantitativelydeterminehogcholeralapinizedvirus
(HCLV).[Method]Afragmentof200basepairspecifictotheHCLVgenome
wasamplifiedbyRT-PCRandarecombinantplasmidwiththegene
fragmentwasconstructed.Therecombinantplasmidwasdilutedseriallyas
templatesforSYBRGreenⅠFQ-PCRtodrawastandardcurvefor
quantitativedetectionofHCLV.[Result]Duringthetemplatesconcentration
of(6.4×1076.4×102)copies/μL,theamplificationefficacywas92.2％,the
coefficientofdeterminationforthedevelopedstandardcurvewas
0.9997.Theaccuratesensitivityofthegeneratedassaywas640
copies/μL,anditscoefficientofvariationwaslessthan2％inthe
reproducibleassays.Thedetectionresultsofbovineviraldiarrhea
virus,porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusandother
epidemicswineRNAviruseswereallnegative.Theclinicaldetectionresults
indicatedthattherewereobviousdifferencesinthevirusloadofseveral
differentcommercialclassicalswinefevervaccines.[Conclusion]AFQ-PCR
assayforHCLVwithgoodspecificityandsensitivitywasdeveloped.%[目的]
建立一种检测猪瘟疫苗病毒(HCLV)含量的荧光定量PCR方法.[方法]用RT-PCR方
法扩增HCLV基因200bp片段,构建含有该基因片段的重组质粒,对此重组质粒进
行系列稀释后作为SYBRGreenⅠ荧光定量PCR模板,绘制定量检测HCLV的标准
曲线.[结果]在(6.4×107～6.4×102)copies/μL模板浓度范围内,荧光定量PCR的
扩增效率为92.2％,标准曲线的决定系数为o.9997.该方法的精确灵敏度为
640copies/μL,重复性试验的变异系数小于2％,对牛病毒性腹泻病毒、猪繁殖与呼
吸综合征病毒等的检测结果均为阴性.临床检测结果显示,不同商品猪瘟疫苗之间的
病毒载量存在明显差异.[结论]建立了1种具有良好特异性与敏感性的HCLV荧光
定量PCR检测方法.
【期刊名称】《北京农学院学报》
【年(卷),期】2017(032)003
【总页数】4页(P85-88)
【关键词】猪瘟疫苗病毒;荧光定量PCR;定量检测
【作者】李满;刘鑫宇;杨倩;于红欣;周双海
【作者单位】北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京市大兴区动物疫病
预防控制中心,北京102400;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农学
院动物科学技术学院,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北
京农学院动物科学技术学院,北京102206
【正文语种】中文
【中图分类】S852
猪瘟病毒属于黄病毒科成员，是引起猪瘟的病原，其基因组核酸类型为RNA；猪
瘟容易侵害不同品
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