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釉原蛋白羧基末端肽加速细胞周期促进成釉细胞系ALC细胞

增殖

刘敏;王睿捷;宋丹阳;杨随;谭陶;王磊;王衣祥

【期刊名称】《《中国组织工程研究》》

【年(卷),期】2020(024)001

【总页数】7页(P99-105)

【关键词】釉原蛋白羧基末端肽;釉原蛋白;成釉细胞;细胞增殖;细胞周期;

MAPK-ERK信号通路;牙釉质发育

【作者】刘敏;王睿捷;宋丹阳;杨随;谭陶;王磊;王衣祥

【作者单位】北京大学口腔医院修复科北京市100081;北京大学首钢医学院口腔

科北京市100144;北京大学口腔医院中心实验室北京市100081

【正文语种】中文

【中图分类】R459.5;R394.2;R783

0引言Introduction

釉原蛋白是釉基质蛋白的重要成分之一，约占釉基质的95%，是牙釉质形成、成

熟、矿化的主要基质[1]。釉原蛋白是由釉原蛋白基因的可变剪接及转录后修饰形

成的一种富含脯氨酸的多肽家族，由于存在可变剪接以及釉质发育过程中的酶解作

用，釉原蛋白及其衍生肽组成了釉基质[2-3]。釉原蛋白是极性分子，包含疏水的

N-端和亲水的C-端，两个末端在物种间高度保守。研究表明釉原蛋白除了在釉质

基质成熟和矿化中所起的直接作用外，釉原蛋白可变剪接体及其蛋白水解产物等成

分也被认为具有信号传导作用[4]。早期研究主要关注于釉原蛋白的可变剪接体作

为信号分子的特定作用，尤其关注于其在复杂的牙骨质形成过程的作用，能够促进

牙骨质的形成和附着[5]。

基质金属蛋白酶20是在釉质发育特定阶段表达的酶，可以水解釉原蛋白产生C-

末端多肽[6-7]。研究表明，釉原蛋白C-末端的11个氨基酸组成的多肽，即釉原

蛋白羧基末端肽(C-terminusoftheamelogeninpeptide，AMG-CP)是重要的

信号分子区段，能够对人成牙骨质细胞、骨髓间充质干细胞、MC3T3-E1(小鼠胚

胎成骨细胞前体细胞)的增殖或分化进行调控[6-9]。AMG-CP对成釉细胞的作用尚

未见报道。该研究通过细胞增殖、细胞周期和通路阻断实验，研究AMG-CP对成

釉细胞系ALC细胞增殖的影响及作用机制。

1材料和方法Materialsandmethods

1.1设计细胞学实验。

1.2时间及地点2018年7月至2019年2月在北京大学口腔医院中心实验室完成。

1.3材料

1.3.1AMG-CP的合成序列及检测报告AMG-CP的合成序列为Ac-

STDKTKREEVD-NH2(相对分子质量为1347.64)，委托北京赛百盛生物科技有限

公司合成。合成的AMG-CP进行了液相色谱-质谱(HPLC-MS)分析。无菌去离子

水溶解多肽冻干粉，按实验所需浓度稀释分装。

1.3.2实验细胞小鼠成釉细胞系ALC细胞(ameloblastlineagecells，ALC)由滨州

医学院高玉光教授馈赠。

1.3.3实验试剂及仪器DMEM/F12培养基(Hyclone，美国)；胰蛋白酶(Gbico，

美国)；胎牛血清(AWB，乌拉圭)；青霉素/链霉素(Gbico，美国)；BAC试剂盒(康

为世纪，北京)；U0126(Selleck，上海)；兔源p-ERK1/2单克隆抗体，total-

ERK1/2单克隆抗体和兔源GAPDH多克隆抗体(CellSignalingTechnology，美

国)；二氧化碳恒温培养箱(Thremo，美国)；医用净化工作台(Thremo，美国)；

纯水系统(Millipore，美国)；xCELLigenceRTCA细胞分析系统检测系统(ACEA

Biosciences，美国)；E-PlateL8电极板(ACEABiosciences，美国)；Odyssey

双色红外荧光成像系统(Licor，美国)；Nanodrop2000(ThermoFisher，美国)；

QuantStudio®3实时荧光定量PCR仪器(Thremo，美国)；荧光倒置显微镜

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