检测METTL3_14及端粒酶的荧光生物传感器的构建.pdf

目录

摘要I

AbstractIII

第一章绪论1

1.1核酸修饰酶1

1.2RNA甲基转移酶-METTL3/141

1.2.1METTL3/14功能简述1

1.2.2METTL3/14检测意义2

1.2.3METTL3/14检测方法的研究进展3

1.3端粒酶6

1.3.1端粒酶功能简述6

1.3.2端粒酶检测意义7

1.3.3端粒酶检测方法的研究进展8

1.4构建荧光生物传感器用于检测核酸修饰酶11

1.5本论文研究内容15

6

第二章构建荧光编码的纳米结构用于灵敏检测临床组织中mA修饰酶-METTL3/14的

活性16

2.1引言16

2.2实验部分17

2.2.1材料和试剂17

2.2.2捕获探针与羧基修饰的磁珠共轭18

2.2.3METTL3/14复合物的检测19

2.2.4凝胶电泳分析19

2.2.5荧光光谱测量19

2.2.6动力学分析20

2.2.7抑制剂筛选20

2.2.8实际样品分析20

2.2.9酶联免疫吸附实验21

2.3结果与讨论21

2.3.1METTL3/14复合物检测的工作原理21

2.3.2MazF酶反应原理23

2.3.3酰胺信号放大原理23

2.3.4可行性分析23

2.3.5实验条件的优化25

2.3.6灵敏度检测27

2.3.7特异性分析28

2.3.8动力学测量29

2.3.9抑制剂分析30

2.3.10细胞中METTL3/14复合物活性的测量30

2.3.11乳腺组织中METTL3/14复合物活性的测量32

2.4本章小结34

第三章构建酶控的DNA纳米机器用于活细胞中端粒酶的一步成像35

3.1引言35

3.2实验部分36

3.2.1试剂及仪器36

3.2.2基底探针和报告探针的制备37

3.2.3DNA纳米机器的构建37

3.2.4细胞培养及端粒酶提取物的制备38

3.2.5体外端粒酶活性测定38

3.2.6凝胶电泳分析38

3.2.7荧光光谱测量39

3.2.8紫外可见光谱测量39

3.2.9抑制剂筛选39

3.2.10活细胞中端粒酶成像39

3.3结果与讨论40

3.3.1端粒酶检测原理40

3.3.2DNA纳米机器的详细行走步骤41

3.3.3用于端粒酶体外检测的DNA纳米机器的表征42

3.3.4定量荧光测量43

3.3.