液相色谱检测操作规程 .pdfVIP

文件编号：SC-SOP-00400第1页共1页

文件名：液相色谱检测操作规程

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1.目的：规范液相色谱检测操作

2.范围：适用于抗菌肽有效成分检测

3.职责：实验室人员对本操作规程的实施负责。

4.内容：

4.1样品制备

取300ul样品液加入到1.2ml甲醇中，摇匀浸提60min，然后3500rpm离心15min，取上

清用0.22um的一次性过滤器过滤待用，然后将一次性插管置于样品瓶中，加入20ul滤

液，盖上盖子。

4.2流动相配制

有机相：乙腈装于带盖玻璃瓶中，稍拧瓶盖，置于超声清洗机超声15min，去除气泡。

无机相：使用色谱级乙酸铵配制10mmol/L的乙酸铵溶液，用超纯水配制，装于带盖玻璃

瓶中，稍拧瓶盖，置于超声清洗机超声15min，去除气泡。

水：装于带盖玻璃瓶中，稍拧瓶盖，置于超声清洗机超声15min，去除气泡。

4.3仪器准备

安装色谱柱：将色谱柱按照柱子的箭头指向安装，拧紧固定螺母

开机：打开电脑，然后依次打开泵、进样器、柱温箱、检测器电源，电脑端连接仪器。

平衡基线：将泵的吸取头依次插入对应的有机、无机相瓶中，开启泵和进样器的排气，然

后电脑端开启主控、柱温箱、泵，开始平衡基线，待基线呈现为直线时即可。

4.4上样：将装有待检样品的样品瓶放入进样箱内，记录位置和对应样品瓶编号

4.5检测：设定好对应的方法文件，检测波长为210nm，柱温为30℃，设置流动相比例

为有机相：无机相=35：65，流速为0.3ml/min，进样10ul。

4.6结束：检测完成后，关闭泵，将无机泵吸取头取出置于准备好的水中，开启泵的排

气，将有机和无机相的比例调整为50%，流速为1ml/L，开启泵，冲洗色谱柱半个小时以

上，依次关闭检测器、柱温箱、进样器、泵、电脑，取出色谱柱，清理垃圾。

5.注意事项

5.1注意所有进入仪器的液体必须超声除去气泡，非色谱级试剂必须使用0.22um的一次

性过滤器过滤，水必须使用超纯水。

5.2设备必须按照操作规程使用，禁止不熟悉的人员单独使用。

5.3如果出现异常及时联系相关人员

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