非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 .pdfVIP

山东农业科学２０２３ꎬ５５(１０):１４０~１４５ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ

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ＤＯＩ:１０.１４０８３/ｊ.ｉｓｓｎ２０２３.１０.０１９

非洲猪瘟病毒ｐ２２蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

１ꎬ２２∗１２２２２

矫健ꎬ李建达ꎬ韩先杰ꎬ张琳ꎬ张玉玉ꎬ任素芳ꎬ刘飞ꎬ

２２３１ꎬ２１ꎬ２

陈智ꎬＮａｔａｌｉｉａＨｒａｂｃｈｅｎꎬ张文娟ｋꎬｏ于江ꎬ吴家强

(１.青岛农业大学动物医学院ꎬ山东青岛２６６１０９ꎻ２.山东省农业科学院畜牧兽医研究所/

山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室/农业农村部畜禽生物组学重点实验室ꎬ山东济南２５０１００ꎻ

３.山东碧蓝生物科技有限公司ꎬ山东泰安２７１４００)

摘要:非洲猪瘟(ＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖＡＳＦ)ｅｒꎬ是由非洲猪瘟病毒(ＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｖｅｒｉｒｕｓꎬＡＳＦ引起的Ｖ)一

种高度传染性病毒性疾病ꎬ发病率和死亡率高达１００对我国的％ꎬ生猪养殖业造成了毁灭性打击ꎮｐ２２蛋白为

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ＡＳＦ的结构蛋白Ｖꎬ本研究构建了重组原核表达质粒ｐＥＴ３２ａｐ２２ꎬ将其转化至大肠杆菌ＢＬ２１(ＤＥ３)感受态

细胞表达重组ｐ２２蛋白并纯化ꎬ经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定证实重组ｐ２２蛋白与ＡＳＦ阳性血清有良好的Ｖ免疫反应

性ꎮ利用重组ｐ２２蛋白免疫Ｂａｌ/ｃ小鼠并ｂ通过间接ＥＬＩＳＡ方法筛选到２株能够稳定分泌ｐ２２蛋白单克隆抗

体(ＭＡｂ的杂交瘤细胞株)２Ｄ６和５Ｅ７ꎮ经抗体亚型鉴定两株抗体均为ＩｇＧ１型ꎻ经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定ꎬ两株抗

体能够特异性识别过表达的ｐ２２蛋白ꎮ综上ꎬ本研究成功表达并纯化了ｐ２２重组蛋白ꎬ制备了ｐ２２单克隆抗

体ꎬ为进一步探讨ｐ２２蛋白的结构功能及其在ＡＳＦ中的感染致Ｖ病机制提供了基础条件ꎮ

关键词:非洲猪瘟病毒ꎻｐ２２蛋白ꎻ单克隆抗体ꎻ原核表达

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＋１文献标识号:Ａ文章编号２０２３

中图分类号:Ｓ８５２.６５

ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｏｉｃａｔｉｏｎＭｆｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙ

ａｇａｉｎｓｔｐ２２ＰｒｏｔｅｉｎｏｆＡｆｒｉｃａｎＳｗｉｎｅＦｅｖＶｅｒｉｒｕｓ

ＪｉａｏＪｉａｎꎬＬｉＪｉａｎｄａꎬＨａｎＸｉａｎｊｉｅꎬＺｈａｎｇＬｉｎꎬＺｈａｎｇＹｕｙꎬｕＲｅｎＳｕｆꎬａｎｇ

１ꎬ２２∗１２２２

ＬｉｕＦｅｉꎬＣｈｅｎＺｈｉꎬＮａｔａｌｉｉａＨｒａｂｃｈｅｎꎬＺｈａｎｇｋＷｏｅｎｊｕａｎꎬＹｕＪｉａｎｇꎬＷｕＪｉａｑｉａｎｇ

２２２３１ꎬ２１ꎬ２

(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏＶｆｅｔｅｒｉｎａｒＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＱｙｉｎｇｄａｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖꎬｅｒｓｉｔＱｉｎｇｄａｏ２６６１０９ꎬｙＣｈｉｎａꎻ

２.ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏＡｎｉｍａｌｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＶ