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岛津LC-20AT液相色谱仪操作规程

一、开机前准备

1、流动相按照标准要求配制流动相，需使用色谱纯试剂，有机相和

纯水不用过滤，可直接超声脱气后使用。无机盐溶液流动相必须使用

溶剂过滤器过滤，根据溶液不同选择不同的滤膜（有机相/水相），过

滤后超声脱气使用。脱气时需盖上瓶盖，但不拧紧。有机相流动相脱

气必须在通风橱或高温室操作。将配制好的流动相接入液相色谱仪的

流路。一般纯有机相接入A泵，纯水接入D泵，无机盐溶液接入B

泵。注意观察洗液瓶是否还有洗针水，洗针水为1：1甲醇水。

2、色谱柱按标准要求选择色谱柱，一般为C18柱，苯并芘有专用柱，

糖类分析用氨基柱。色谱柱安装：色谱柱上有箭头，按流路方向安装，

根据所要使用的检测器在色谱柱的出口端接上不同接头。

二、开机

1、打开泵→自动进样器→柱温箱→检测器→控制器→电脑软件

Labsolution。点击自动进样器上Purge键，使自动进样器进入自动清

洗状态，25分钟自动停止。双击选择适用的检测器，SPDA为二极管

阵列检测器，RF为荧光检测器，ELSD为蒸发光散射检测器。标准要

求使用紫外检测器或者二极管阵列检测器的均选择二极管阵列检测

器，此检测器为最常用检测器，一般项目均使用此检测器。要求使用

示差折光检测器或者蒸发光散射检测器的均选用蒸发光散射检测器，

本实验室应用主要为葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、乳糖、三氯蔗糖，

使用该检测器需打开气体，气体为氮气或空气，需使用99.999%纯度

以上。荧光检测器本实验室主要用于黄曲霉毒素B族和G族、苯并

芘的检测。

2、新建方法文件

文件→新建方法文件将等度洗脱修改为低压梯度，最高柱压由

10MPa改为20MPa，设置柱流速为1ml/min，根据标准要求选择光源，

检测波长小于350nm打开D2灯，350nm以上打开W灯。设置完成

后点击“下载”。

流路排气根据选择的流路进行排气，所需要使用的每个流路均需排

气。以选择A、B流路为例，逆时针旋转打开排气阀，将B、C、D泵

流量设为0，点击“下载”，然后在泵上点击Purge键，显示屏上显示

“Purgeline”，进入A泵排气阶段。等待3分钟左右，带显示屏上显

示流速和柱压后，A泵排气完成。在电脑上将B泵流量设为100%，

其他流路均为0，点击“下载”，然后在泵上点击Purge键，进入B

泵排气阶段。等待排气完成后，顺时针旋转关闭排气阀。流路排气完

成。

根据标准要求设置柱温箱温度，点击柱温箱上“FUC”，然后点击

“ENTER”,将温度修改为所需温度，再点击“ENTER”,最后点击两次

“CE”,柱温设置完成。

按标准要求在电脑上设置流动相配比，保存方法文件，点击“下载”。

方法文件建立完成。

3、开泵开泵有两种方法，①点击软件上“开泵”键。②点击泵上

PUMP键。开泵后流动相按照设定比例进入色谱柱。注意观察泵显示

屏上的柱压，柱压不能超过20MPa，且需处于恒定值。

4、开泵后将鼠标放到色谱图上点击右键，设置所需波长。点击“绘

图”（仅二极管阵列检测器需执行这一步操作）→ALL，观察基线稳定

性，基线平滑后才可进行进样操作。放大基线，基线在±1范围内波

动可认为基线平滑。

四、批处理分析

点击软件左边框中“批处理分析”，首先设置数据需要保存的文件夹。

建立批处理文件时需设置样品瓶号、样品名称、方法文件、数据文件

名。样品品号根据所放进样瓶的位置设置，样品名称根据自身需要设

置，设置完成后将所有样品名称复制粘贴到数据文件名一栏。方法文

件点击框中小箭头，选择出前面建立的方法文件。

柱冲洗柱冲洗一般选用有机相和纯水混合冲洗，有机相一般为甲醇

或者乙腈。若实验使用的流动相为有机相+纯水，可以使用50%的甲

醇水等度洗脱。若实验使用的流动相为无机盐溶液，需执行梯度洗脱，

先使用大比例的水相冲洗，例如90%的甲醇水、乙腈水，然后调整增

加有机相比例，至50%以下。最后将柱流速降低至0.1ml/min，可不

关机。需先建立一个柱冲洗方法文件，可设置柱流速为0.8ml/min，

最大柱压为20MPa，光源设置为“OFF”，根据需要设置梯度洗脱程

序。

批处理分析最后一栏进样瓶号设置为“-1”，方法文件选择建立好的

柱冲洗程序。待观察到基线平滑后点击“批处理分析开始”。

五、标准曲线建立

打开色谱图数据，点击右边框“编辑”，按标准要求修改至所需波长，