小鼠铁调素(Hepcidin)ELISA检测试剂盒操作步骤 .pdfVIP

小鼠铁调素（Hepcidin）ELISA检测试剂盒

操作步骤

小鼠铁调素（Hepcidin）ELISA检测试剂盒使用说明书

检测原理

试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往

预先包被铁调素（Hepcidin）抗体的包被微孔中，依次加入标本、

标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。用底物TMB

显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转

化成最后的黄色。颜色的深浅和样品中的铁调素（Hepcidin）呈正

相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓

度。

样品收集、处理及保存方法

1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何

细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速

当心地分别。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取

上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

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4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10

分钟取上清。

5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻

存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解

冻。

自备物品

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、

2001000uL

3.37℃恒温箱

操作注意事项

试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的

浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶

解后再使用。

试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保

存。

浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明

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书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。

严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。

全部液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒构成

名称96孔配置48孔配置备注

微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无

标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无

样本稀释液6mL3mL无

检测抗体HRP10mL5mL无

20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释

底物A6mL3mL无

底物B6mL3mL无

停止液6mL3mL无

封板膜2张2张无

说明书1份1份无

自封袋1个1个无

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注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、1、2、4、8、16ng/mL

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×

洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽

孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用

自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品

50μL；

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔

不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶

（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴

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锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍