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支原体检测验证方案

目录

一、内容概要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.2目的与范围．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

二、支原体概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

2.1支原体的定义与分类．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

2.2支原体的生物学特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

2.3支原体感染的临床特点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

三、支原体检测方法概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

3.1细菌培养与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

3.2聚合酶链反应．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

3.3荧光定量PCR．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

3.4其他检测技术简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

四、支原体检测验证方案．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

4.1实验室环境与设备要求．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

4.1.1实验室卫生与消毒．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

4.1.2实验仪器与试剂准备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

4.2样本采集与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

4.2.1样本来源与采集方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

4.2.2样本运输与保存条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

4.2.3样本处理与核酸提取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

4.3实验操作流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

4.3.1细菌培养与鉴定步骤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

4.3.2PCR扩增与检测步骤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

4.3.3荧光定量PCR操作步骤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

4.4结果判定与报告．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

4.4.1结果判定标准．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

4.4.2报告内容与格式要求．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

五、支原体检测验证实施细节．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

5.1实验室安全操作规范．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

5.1.1个人防护装备使用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

5.1.2实验室清洁与消毒程序．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

5.2样本管理与质量控制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

5.2.1样本编号与追踪系统．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

5.2.2样本复查与比对试验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

5.3数据分析与结果验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

5.3.1数据统计方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

5.3.2结果验证流程与标准．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

六、支原体检测技术的应用与发展趋势．．．．．．．．．．．．．．．