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单抗制备抗原免疫兔子操作流程
单抗制备的操作流程包括以下步骤:
1.制备兔子的源抗原:根据需要制备的单抗,选择相应的目标
蛋白或多肽,将其纯化或合成为抗原。可以通过细菌、酵母或
哺乳动物细胞表达目标蛋白来获得抗原。
2.兔子免疫:将制备好的抗原与适量的兔子血清混匀,然后注
射到兔子体内。通常先进行初次免疫,随后再进行多次增强免
疫以提高抗原的免疫效果。
3.血清采集:在兔子开始出现很好的免疫应答后,使用无菌器
具采集兔子的血清。以血管穿刺或静脉采血的方式收集兔子的
血样。
4.血清处理:将采集得到的血清置于冰箱中静置一段时间,以
促使血清凝固。然后使用离心机将血清离心,将上清部分即为
富含目标单抗的抗体血清。
5.单抗纯化:可以通过酸性沉淀、阳离子交换层析、亲和层析
或凝胶过滤等方法对抗体血清进行纯化,以获取单抗。
6.验证单抗:使用相应的分析方法,如酶联免疫吸附试验
(ELISA)或Westernblotting等方法来验证单抗的效力和特异
性。
7.应用:将制备好的单抗与其他实验方法结合使用,如免疫组
织化学染色、免疫印迹、流式细胞术等,用于检测、测定或研
究目标分子在生物系统中的表达、定位、相互作用等。
需要注意的是,单抗制备的具体操作步骤可能会因实验目的、
抗原的性质和兔子的品系等因素而有所不同,可以根据实际需
求进行相应的调整。在进行实验操作时,应遵守相关的实验室
安全规范和伦理规定。
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