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液相色谱法测定固体饮料中维生素B12的含量

顾娅楠;战虎

【摘要】建立一种高效液相色谱(highperformanceliquid

chromatography,HPLC)测定固体饮料中维生素B12含量的方法.样品经水超声、

提取、离心、免疫亲和柱净化处理,采用C18色谱柱,以磷酸氢二钠溶液:甲醇

=76:24(体积比)作为流动相,361nm紫外检测,外标法测定.结果表明,维生素B12

在0.1μg/mL～10μg/mL浓度线性范围内关系良好,相关系数(R2)大于0.999,加标

样品的平均回收率为91.4％,相对标准偏差(relativestandarddeviation,RSD)为

(n=9)2.55％,检出限为0.001μg/g.试验表明,该方法灵敏度和准确性较高,具有较好

的可操作性,适用于固体饮料中维生素B12含量的测定.

【期刊名称】《食品研究与开发》

【年(卷),期】2018(039)016

【总页数】4页(P149-152)

【关键词】维生素B12;高效液相色谱法;免疫亲和

【作者】顾娅楠;战虎

【作者单位】天津市食品研究所有限公司,天津301609;天津市食品研究所有限公

司,天津301609

【正文语种】中文

维生素B12（VitaminB12，简称VB12）又称氰钴胺素（Cobalamin），是一种

含有3价钴的多环系化合物，也是唯一一种含有金属离子的水溶性维生素，为浅

红色的针状结晶，其主要生理功能是参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血[1]。维

生素B12的主要饮食来源是动物性食物，比如牛奶、奶酪以及动物肝脏等[2]。维

生素B12的缺乏会导致恶心贫血，人体日常需求量甚微，而添加维生素的固体饮

料中含量仅约为0.01μg/kg～0.07μg/kg。含量甚微是目前维生素B12检测难题。

目前测定维生素B12的方法主要有酶联免疫法[3-5]、微生物法[6-8]、高效液相色

谱法[9-13]以及液相色谱-质谱串联法[14-17]等。酶联免疫法成本较高且重复性不

佳，国内市场还不够成熟；微生物法灵敏度、准确性较高，但由于检测周期长，人

员技能要求强，重复性差而不能被广泛应用；液相色谱-质谱串联法对设备要求较

高，价格更贵，不适宜普及；液相色谱法测定维生素B12，但多为含量较高的保

健食品，对于含量低或者基质较复杂的食品，多不能满足检测要求。本方法主要针

对固体饮料类样品，采用简单方便的前处理手段，结合普通的反相高效液相色谱法

达到检测固体饮料中维生素B12含量的目的。本方法具有简单、快速、结果可靠、

成本低等优点。

1材料与方法

1.1试剂

维生素B12标准品（纯度≥95%）：Dr.EhrenstorferGmbH、甲醇（色谱纯）：

德国默克公司；乙醇（分析纯）：天津市康科德科技有限公司；磷酸氢二钠（优级

纯）：天津市津东天正精细化学试剂厂；磷酸（分析纯）：天津市津东天正精细化

学试剂厂；超纯水：Milli-Q超纯水系统制备。

1.2仪器与设备

UltiMate3000高效液相色谱仪（配VWD-3100型检测器）、LPVortexMixer

漩涡振荡器、ThermoBDSHYPERSILC18色谱柱：赛默飞世尔科技有限公司；

AB265-S型电子分析天平：梅特勒-托利多仪器有限公司；SCI-NT2800D型超声

波清洗器：天津市圣信唯科技有限公司；TGL-16M型离心机：湘仪离心机仪器有

限公司；RE-52AA型旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；维生素B12免疫亲和净

化柱：德国拜发公司。

1.3试验方法

1.3.1色谱条件

色谱柱：ThermoBDSHYPERSILC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流

动相：0.028mol/L磷酸氢二钠溶液（磷酸调至pH=3.5）-甲醇=76∶24（体积

比）；流速：1.0mL/min；检测器波长：361nm；柱温：30℃；进样量：10μL。

1.3.2标准溶液的制备

称取维生素B12标准品10mg（精确至0.1mg）于10mL棕色容量瓶中，用5%

乙醇溶液溶解并定容，摇匀，即得浓度为1mg/mL