真鲷虹彩病毒分子标准样品及其制备方法 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN103589806A

(43)申请公布日2014.02.19

(21)申请号CN201310557677.0

(22)申请日2013.11.07

(71)申请人吴斌;肇慧君;林长军;胡强

地址116001辽宁省大连市中山区长江东路60号

(72)发明人吴斌肇慧君林长军胡强

(74)专利代理机构大连东方专利代理有限责任公司

代理人贾汉生

(51)Int.CI

C12Q1/70

C12Q1/68

C12N15/11

C12N15/70

C12N15/66

C12R1/93

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

真鲷虹彩病毒分子标准样品及其制

备方法

(57)摘要

本发明提供一种真鲷虹彩病毒分子

标准样品及其制备方法，具体包括RSIV

的原料选取、标准样品的制备、均匀性和

稳定性检查、定性检定、定值等过程。所

述标准样品的制备方法包括：由RSIV病

毒液中提取病毒DNA、PCR反应扩增并纯

化目的基因片段、目的片段的连接转化；

回收质粒的步骤。本发明的真鲷虹彩病毒

标准样品稳定性高、均匀性好，为真鲷虹

彩病毒的检测研究、医药研究、应用研究

提供了标准样品的需求，同时为检验检疫

机构技术指导、服务出口企业提供技术上

的支持。使用本发明的标准样品可以实现

不同实验室结果的比对，从而保证实验室

的质量控制。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种真鲷虹彩病毒的检测引物，其特征在于，碱基序列为SEQIDNO：

1～2。

2.一种真鲷虹彩病毒的检测试剂盒，其特征在于，包括检测引物：SEQID

NO：1～2。

3.一种真鲷虹彩病毒的标准样品，其特征在于，制备步骤包括：

（1）采集感染真鲷虹彩病毒的鱼组织，研磨、得鱼组织匀浆液；

（2）将鱼组织匀浆液加入到长成单层的GF细胞中，吸附1小时后，加入

培养基继续培养、待细胞感染病毒脱离时，回收细胞经反复冻融、离心得细

胞上清液；

（3）步骤（2）得到的细胞上清液中提取得到病毒DNA；

（4）步骤（3）的病毒DNA作为PCR反应模板，进行PCR扩增反应，其

中PCR反应的正反引物分别为SEQIDNO：1和SEQIDNO：2；

（5）将步骤（4）的PCR扩增产物经纯化后连接至PGEM-T载体中，连接

产物转化至感受态细胞后，LB平板培养，筛选得到阳性克隆；

（6）阳性克隆中提取得到质粒，即为真鲷虹彩病毒的标准样品。

4.根据权利要求3所述的真鲷虹彩病毒的标准样品，其特征在于，在步骤

（2）中所述培养基为L-15培养基；在步骤（5）中筛选阳性克隆的方法为

PCR方法，其中PCR反应的正反引物分别为SEQIDNO：1和

SEQIDNO：2。

5.根据权利要求3所述的真鲷虹彩病毒的标准样品，其特征在于，在步骤

（1）中所述鱼组织包括脑、肝、肾和脾。

说明书

p技术领域

本发明属于检测用病毒培养物标准品及其制备方法技术领域，具体涉及真鲷虹彩病

毒标准样品及其制备方法。

背景技术

我国是世界上最大的水产品生产和输出国，目前，我国水产品总量已占全球渔业总

产量的40%，连续15年居世界首位，养殖水产品产量占世界养殖总产量的70%。

水产品在保障国家粮食安全、促进农民增收和农村经济稳步发展中发挥了重要作用。

我国水海产品出口面