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谷物维生素B测定方法

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1.适用范围

本标准适用于测定谷物中维生素B的含量。

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2原理概要

维生素B（即硫胺素CHONSCl·HCl）在碱性条件下被铁氰化钾氧化成荧

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光色素——硫色素，硫色素在正丁醇中的荧光强度与样品中维生素B的含量成

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正比，依此进行维生素B的定量测定。

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3主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

盐酸，0.1mol／L溶液，将8.5mL盐酸用水稀释至1000mL；

硫酸，0.05mol／L溶液。将2.8mL浓硫酸加入水中，稀释至1000mL；

乙酸钠，2.5mol／L水溶液。205g无水乙酸钠或345g结晶乙酸钠溶于水，

稀释至1000mL；

淀粉酶（可选用Takadiastase，或接近其活性的其他磷酸酯酶），60g／L悬

浮液：用2.5mol／L乙酸钠溶液悬浮6g淀粉酶制剂，稀释至100mL；

氯化钾，250g／L水溶液；

酸性氯化钾溶液：将8.5mL浓盐酸加入250g／L氯化钾溶液中，并稀释至

1000mL；

氢氧化钠，150g／L水溶液；

铁氰化钾，10g／L水溶液；

碱性铁氰化钾溶液：10g／L铁氰化钾溶液与150g／L氢氧化钠溶液按1∶14

容积比配制。现用现配；

冰乙酸，30mL／L水溶液；

人造沸石：使用前必需活化，方法如下：

将适量人造沸石置于大烧杯中，加入十倍其容积的3％热乙酸溶液，用玻棒

均匀搅动10min，使沸石在乙酸溶液中悬浮，待沸石沉降后，弃去上层乙酸液。

重复上述操作一次。换用五倍其容积的热氯化钾溶液搅动清洗两次，每次15min。

再用热乙酸溶液洗10min。最后用热蒸馏水清沸浮石至无氯离子（用10g／L硝

酸银水溶液检验）。用布氏漏斗抽滤，烘干，贮于磨口瓶中备用；

使用前，检查沸石对硫胺素标准溶液的回收率，如达不到92％，需重新活化

沸石；

硫胺素标准溶液：

硫胺素贮备液Ⅰ：盐酸硫胺素，于五氧化二磷干燥器中干燥24h，称取0.0500g，

VV

溶解于25％（／）乙醇水溶液中并定容至500mL，盛于棕色瓶中低温保存；

该溶液每毫升含0.1mg硫胺素；

硫胺素贮备液Ⅱ：取硫胺素贮备液Ⅰ10mL用25％乙醇液定容至100mL，盛于

棕色瓶中低温保存；

该溶液每毫升中含10μg硫胺素；

硫胺素标准工作液：取贮备液Ⅱ2mL，与75mL盐酸溶液和5mL乙酸钠溶液混

合，用水定容至100mL。现用现配；

该溶液每毫升中含0.2μg硫胺素；

硫酸奎宁硫酸奎宁贮备液：称取硫酸奎宁0.1000g，用0.05mol／L硫酸溶解

并定容至1000mL，贮于棕色瓶中低温保存。若溶液混浊则需重新配制；

该溶液每毫升中含0.1mg硫酸奎宁；

硫酸奎宁工作液：取贮备液3mL，用0.05mol／L硫酸定容至1000mL，盛于

棕色瓶中，低温保存；

该溶液每毫升中含0.3μg硫酸奎宁；

正丁醇，其荧光强度不超过硫酸奎宁工作液的4％，否则需用全玻璃蒸馏器

重新蒸馏，取114～118℃馏份；

无水硫酸钠。

3.2.仪器

容量瓶：100mL，25mL；

吸附分离柱（见图1）；

反应瓶（见图2）；

注射器，20mL；

电热恒温水浴；

电热恒温箱；

荧光分光光度计。

4.试样的选取和制备

选取有代表性的谷物样品（带壳籽粒需脱壳），拣净杂质，按四分法缩减取

样。

将谷物样品在60～65℃烘干后粉碎，过60目筛，装入磨口瓶中备用。

5.过程简述

5.1.称样：称取试样2.500g