一种猪瘟病毒纯化方法 .pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN101974490A

(43)申请公布日2011.02.16

(21)申请号CN201010552731.9

(22)申请日2010.11.17

(71)申请人广东大华农动物保健品股份有限公司

地址527400广东省新兴县堤北路温氏科技园

(72)发明人徐家华陈瑞爱唐秀英

(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司

代理人王加岭

(51)Int.CI

C12N7/02

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种猪瘟病毒纯化方法

(57)摘要

本发明公开了一种从原代牛睾丸细

胞繁殖猪瘟病毒的细胞液中纯化猪瘟病毒

的方法。包括如下步骤：1)对猪瘟病毒细

胞培养液进行过滤；2)通过横向切留超滤

浓缩方式对初滤的猪瘟病毒细胞液进行浓

缩；3)使用阴离子交换层析柱对猪瘟病毒

进行纯化。根据本发明的方法纯化猪瘟病

毒，病毒回收率为71.6％，杂蛋白去除率

为91.06％，病毒活性无明显损失。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种猪瘟病毒纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)对猪瘟病毒细胞培养液进行过滤；2)通过横向切留超滤浓缩方式对初滤的猪瘟病

毒液进行浓缩；3)使用阴离子交换层析柱对猪瘟病毒液进行纯化。

2.根据权利要求1所述的纯化方式，其特征在于，所述的猪瘟病毒细胞培养液为原

代牛睾丸细胞繁殖猪瘟病毒的细胞培养液。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤1)采用0.2～1.2μm的

滤膜进行过滤。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤2)的浓缩倍数为10～

40倍。

5.根据权利要求4所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤2)的浓缩倍数为20倍。

6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤2)的横向切留超滤浓缩

膜孔径为1K～100K。

7.根据权利要求6所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤2)的横向切留超滤浓缩

膜孔径为30K～50K。

8.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述阴离子交换层析柱选自下述

的层析树脂：UNOsphereQ、Marcro-prepHighQ、

QsepharosesupTM/supFastFlowHiPrep16/DEAEFF、DEAE-SephadexA-25或

CMSepharoseFastFlow。

9.根据权利要求8所述的纯化方法，其特征在于，所述阴离子交换层析柱为

Marcro-prepHighQ。

说明书

技术领域

本发明涉及一种猪瘟病毒的纯化方式，具体涉及从原代牛睾丸细胞繁殖猪瘟病毒的

细胞液中纯化猪瘟病毒的方法。

背景技术

猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名

的猪瘟兔化弱毒疫苗，随后创制了不同的疫苗制造工艺，如乳兔组织苗、牛体反应

组织苗和猪瘟牛睾丸细胞苗等，应用比较普遍的是犊牛睾丸细胞苗。猪瘟弱毒疫苗

是一株非常安全的弱毒疫苗，对各种年龄和品种的猪都没有副作用，并且有良好的

免疫效力，它能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答，对不同基因型的猪瘟病毒株均

能提供有效的免疫保护。但是一般用于动物的病毒性疫苗含有来源于动物组织、细

胞和培养基的蛋白质、糖类、脂类及核酸等杂质成分，以及细胞代谢副产物等，易

使接种动物产生过敏，持续发热等副作用。

国际专利WO98/22588色谱层析的方法纯化来自于细胞培养的腺病毒；美国应用

专利US20090123989描述了一种通过超滤的方法从细胞繁殖的含有腺病毒的溶液

中纯化腺病毒的方法；采用离子交换和膜亲和层析的方法纯化病毒颗粒样腺病毒载

体(