小鼠染色体 _原创精品文档.pdfVIP

本科学生实验报告

姓名＿许丽珍104120236＿＿学院＿生命科学学院＿＿＿

专业＿应用生物教育技术＿＿＿班级＿10级A班＿＿

实验课程名称＿遗传学实验＿＿＿＿＿＿＿＿＿

指导教师及职称郭锡汉＿＿＿＿＿

开课时间2012至＿2013学年＿二＿学期

云南师范大学教务处编印

实验名称：小鼠骨髓制备与观实验时间：21021生科院实验楼遗传

察细胞染色体年11月9号学实验室

一、实验预习

1、实验目的

（1）学习并掌握小鼠骨髓细胞染色体的制备方法。

（2）观察小鼠染色体的形态特征,统计细胞的染色体数目。

2、实验设备及材料

（1）器具：注射器（1ml，5ml各一支）、托盘、解剖剪、镊子、吸管、

离心管、离心机、载片、滤纸、白纱布小块等。

（2）药品：0.15mg/ml秋水仙素，1%柠檬酸三钠，固定液（3份甲醇，

1份冰乙酸，临用时现配），Giemsa染液，2.2%柠檬酸钠，0.01M磷酸缓

冲液（PBS）pH6.8。

（3）购买小鼠（体重30克最佳；尽量雌雄各半）

（4）溶液配制：

2.2%柠檬酸三钠：称11g柠檬酸三钠到500ml蒸馏水中，充分溶解；

1%柠檬酸三钠：取5g柠檬酸三钠溶解到500ml蒸馏水中，充分溶解；

PBS（pH6.8):A液：取Na2HPO412g溶于500ml蒸水中，充分溶解；

B液：取KH2PO44.55g溶于500ml蒸水中，充分溶解；使

用时A、B液等体积混合，即为pH6.8的PBS；

0.15mg/ml秋水仙素：取秋水仙素15mg溶于100ml0.85%生理盐水中，

混匀；

75%酒精：取375ml95%乙醇，加入125ml馏蒸水；

二、实验原理

骨髓细胞具有高度的分裂增殖能力。因此可以直接得到中期细胞而不

必象血淋巴细胞或组织那样要经过体外培养。经秋水仙素处理后，分裂增

殖中的骨髓细胞由于纺缍体的形成受到抑制，染色体不能正常趋向两极而

使之停留于中期，同时染色体缩短，轮廓清晰，把收获的细胞进行低渗，

固定处理，使细胞处于膨胀状态，再将细胞悬液滴在载片上，使细胞破裂，

染色体散开，染色后即可观察到染色体。

三、实验方法步骤

1、处理：用1.5mg/kg秋水仙素腹腔注射处理小鼠（注射量为0.1ml/10g

体重）。即用以上配制的秋水仙溶液按每10g体重注射0.1ml。注射后24

小时，可以取骨髓。

处死：断颈法处死小鼠。剪刀剪开腿部的皮肤，用镊子夹住小鼠的股骨，

剪去股骨周围的肌肉，将小鼠的两股骨取出，擦净股骨上的肌肉。去股骨

的髋面，将吸有2.2%柠檬酸三钠溶液的小注射器的针头插入，反复几次

吹出骨髓细胞，反复吹打直至股骨呈白色，制成细胞悬液。

低渗：将细胞悬液在1000rpm/min离心5min，弃除上清液，留0.5ml摇

匀。向细胞液中再加入1%的柠檬酸三钠溶液5ml用吸管轻吹打均匀，在

室温低渗30min。低渗期间，配制固定液，即甲醇：冰醋酸为3:1（v/v)，

置4℃冰箱中备用。

4.预固定(1次)：低渗处理后的细胞悬液离心5分钟，留1ml原液，摇

匀。加入新配制的固定液至6ml，吹打均匀，固定5分钟，再在1000rpm/min

离心3-5min，去掉上清液。固定（2次）：沿离心管壁慢慢加入新配制的

固定液6ml，用吸管轻轻吹打均匀，室温下固定5min，1000rpm/min3min，

弃去上清；如此反复固定两次（共固定3次）。

6.根据管底细胞量的多少，加入新配制的固定液0.3~0.8ml，用吸管打均

匀，使其形成细胞悬液。

7.滴片：将预冷的载玻片（0℃冰浴），水平或倾斜45°角放置，用吸管

吸取细胞悬液，从约0.5-1m高处滴1~2滴到片子上，用口将其吹干，静

置使其干燥。

8.染色：将干燥的玻片放入2ml