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低血清培养ST细胞及生产猪瘟病毒简介

发布日期：2011-4-1

低血清培养ST细胞及生产猪瘟病毒简介

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1ST细胞的特点及用途

1）ST细胞为猪睾丸（swinetestis）细胞，体外培养呈贴壁生长，可进行连续传代培养，常用MEM培养基（代码：MD600）添加10%

左右的小牛血清培养。

2）ST细胞在培养过程中增殖较为缓慢，而且细胞消化传代中容易成团。

3）ST细胞对多种病毒比较敏感，如猪瘟病毒（CSFV）、猪细小病毒（PPV）、伪狂犬病毒等，可应用于猪瘟病毒疫苗、猪细小病毒疫

苗的制备。

2ST细胞低血清培养

1）细胞形态

在方瓶中使用低血清MEM培养基（代码：MD611）逐代降低血清使用量，进行细胞的低血清驯化适应。在低血清培养状态下，ST

细胞轮廓清晰，单层细胞形态良好，细胞生长速度快，具有较高的细胞密度及活力。

图2、图3显示MD611培养基+5%NBS低血清培养的ST细胞形态优于MD600培养基+10%FBS所培养的ST细胞，细胞更健壮。

2）细胞增殖情况

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以3-4×10个/cm的接种密度在T75方瓶（flask）中接种ST细胞进行连续传代培养，3-4天细胞可形成良好单层或致密单层。

从图4可看出，与MD600培养基添加10%NBS培养的ST细胞相比，MD611培养基添加5%、3%NBS培养的ST细胞在起始阶段细胞增

殖速率稍慢，但经2代适应后细胞增殖情况无明显差异，同时表明ST细胞在MD611培养基低血清培养环境中驯化适应较快。

3）细胞转瓶培养

将低血清培养的ST细胞扩大到15L转瓶（rollerbottle）中培养，细胞培养液为MD611培养基添加3-5%血清，以1:4左右分种

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比率进行传代培养，4天细胞可形成致密单层，细胞数量可达4-5×10个/瓶。

图5MD611低血清（5%NBS）转瓶培养的ST细胞A.培养24hrB.培养48hrC.培养72hr

4）MD611培养基低血清培养ST细胞特点

a.MD611培养基为个性化低血清培养基，营养成分比较丰富，可实现ST细胞低血清生长、增殖，支持较高细胞密度及活力，同时细

胞分种比率也有所提高。

b.可延长细胞的维持培养时间。使用MD611培养基低血清培养ST细胞，细胞生长为单层后，以2%血清进行维持培养可达20多天。

c.MD611培养基为无动物来源、化学成分明确的培养基，因此保证了细胞培养中原辅料的使用安全性，有利于疫苗制品质量的控制与

提高。

d.使用MD611培养基，细胞培养阶段血清使用量可降低至3-5%，而细胞维持培养阶段血清使用量可降低至2%左右，可显著减少血清

的使用量。

3ST细胞培养猪瘟病毒

按如下方法对低血清驯化培养的ST细胞进行病毒敏感性的定性验证实验。分别在方瓶、转瓶中使用MD611+3-5%NBS培养已驯化的

ST细胞，待细胞生长为单层后，换用病毒维持液MD611+2%NBS并接种猪瘟病毒（CSFV），控制维持培养pH，进行连续收获病毒。取收

获的病毒液进行PCR检测，实验结果显示：

1）低血清培养的ST细胞具有较高的猪瘟病毒敏感性，第一次收获液、第二次收获液即有病毒存在，且第二次收获液病毒含量明显高

于第一次收获液病毒。

2）第三次收获液病毒含量较第一次收获、第二次收获有明显提高，表明MD611添加2%血清可有效支持猪瘟病毒的繁殖和细胞的维持

培养。

4低血清MEM培养基（MD611）培养ST细胞的一些探讨

1）细胞培养环境改变时，如培养基、血清(包括血清批号、血清厂家、血清浓度等)更换时，细胞培养状态可能会与之前的培养经验有

差异，此时应注意细胞的传代比例、分种时间等，并应根据细胞的生长状态进行调节。如在培养环境改变初期pH变化可能较快，应及

时进行换液培养，ST细胞培养液pH一般不应低于6.8。