GB15399-94饲料中含硫氨基酸测定方法离子交换色谱法(精) .pdf

饲料中含硫氨基酸测定方法离子交换色谱法

发布日期：2004-07-26有效状况：已实施

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【标准名称】饲料中含硫氨基酸测定方法离子交换色谱法

【标准号】GB/T15399-94

【标准文件】

GB／T15399—94

饲料中含硫氨基酸测定方法离子交换色谱法

（畜禽饲料与添加剂）

1主题内容与适用范围

本标准规定了饲料中含硫氨基酸的测定方法。

本标准适用于单一饲料、配合（混合）饲料及浓缩饲料。

2引用标准

GB／T6432饲料粗蛋白质测定方法

GB／T6439饲料水溶氯化物测定方法。

3原理

饲料中的含硫氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸）用过甲酸氧化并经盐酸水解生成磺

基丙氨酸和蛋氨酸砜，此二产物可用离子交换色谱法分离测定。

4试剂

除特别注明者外，所有试剂均为分析纯，水为去离子水，电导率小于1MS。

4.1过甲酸溶液

4.1.1常规过甲酸溶液：将30％过氧化氢（GB6684）与88％甲酸（HG3─1296）按1∶9

（V／V）混合，于室温下放置1h，置冰水浴中冷却30min，临用前配制。

4.1.2浓缩料用过甲酸溶液：将常规过甲酸溶液中按3mg／mL加入硝酸银（GB670）即可。

此溶液适用于氯化钠含量小于3％的浓缩料。

当浓缩料中氯化钠含量大于3％时，氧化剂中硝酸银浓度可用下式计算：

CR≥1.454×m×CN

…………（1）

式中：CR──过甲酸中硝酸银的浓度，mg／mL；

CN──样品中氯化钠含量，mg／mL；

m──样品质量，mg。

4.2氧化终止剂

4.2.148％氢溴酸（GB621）

4.2.2偏重亚硫酸钠溶液：33.6g偏重亚硫酸钠（HG3─909）加水定容至100mL。

4.3酸解剂

4.3.16.0mol／L盐酸溶液：将优级纯盐酸（GB622）与水按1∶1（V／V）混合。

1

4.3.26.8mol／L盐酸溶液：将优级纯盐酸（GB622）1133mL加水稀释重2000mL。

4.47.5mol／L氢氧化钠溶液：取优级纯氢氧化钠（GB629）30g，加水溶解并定容至100mL。

4.5稀释上机用柠檬酸钠缓冲液，pH2.2，0.2mol／LNa：称取柠檬酸三钠（HG3─1298）

19.6g，用水溶解后加入优级纯盐酸16.5mL，硫二甘醇5.0mL，苯酚（HG3─1165）1g，最

后加水定容至1000mL，用G4垂熔玻璃砂芯漏斗过滤。

4.6不同pH及离子强度的洗脱用柠檬酸钠缓冲液：按仪器说明书配制。

4.7茚三酮溶液：取茚三酮适量，按仪器说明书配制。

4.8磺基丙氨酸-蛋氨酸砚标准贮备液，2.50μmol／mL：准确称取磺基丙氨酸105.7mg和蛋

氨酸砜113.3mg，加水溶解并定容至250mL。

4.9氨基酸混合标准贮备液：含有L-天门冬氨酸、L-苏氨酸等17种常规蛋白质水解分析用

L-氨基酸，各组份浓度为2.50μmol／mL。

4.10混合氨基酸标准工作液：吸取磺基丙氨酸-蛋氨酸砜标准贮备液（4.7）和氨基酸混合

标准贮备液（4.8）各1.00mL，置于50mL容量瓶中，加稀释上机用柠檬酸钠缓冲液（4.4）

定容，混匀。有关各组份浓度为50nmol／mL。

5仪器、设备

5.1实验室用样品粉碎机；

5.2样品筛：孔径0.45mm（40目）；

5.3分析天平：感量0.0001g；

5.4喷灯；

5.5旋转蒸发器或浓缩器：可在室温至65℃间调温，控温精度±1℃，真空度可低至3.3×

103Pa（25mmHg柱）。

5.6恒温箱或水解炉；

5.7氨基酸自动分析仪：要求蛋氨酸砚的分辨率大于90％。

6样品

取具代表性的饲料样品，用四分法缩减分取25g左右，粉碎并过0.45mm孔径（40目）

筛，充分混匀后装入磨口瓶中备用。

7分析步骤

7.1氧化和水解：称取含蛋白质7.5～25mg的试样双份（精确至0.0001g，样品量不超过

75mg），置于旋转蒸发器20