亚硒酸钠 甲基硒酸诱导犬乳腺癌细胞凋亡试验 .pdfVIP

维普资讯

中国兽医杂志２００８年（第４４卷）第２期３３

亚硒酸钠甲基硒酸诱导犬乳腺癌细胞凋亡试验

邱昌伟，李成叶，邓干臻，王金秋，林德贵

（１．中国农业大学动物医学院，北京海淀１０００９４；２．华中农业大学动物医学院，湖北武汉４３００７０）

中图分类号：￥８５７．４文献标识码：Ｂ文章编号：０５２９６００５（２００８）０２—００３３—０２

硒是自然界中稀有元素之一，是人体必需的微长为４８８ｎｌＴｌ，发射光波波长大于６３０ｎｍ产生红色

量元素，具有广泛的生物学功能一。经大量的前瞻荧光，从而可以测定细胞周期，观察Ｇ１期、Ｇ２期、Ｓ

性研究和动物实验研究表明，硒还具有防癌和抗癌期各期细胞所占的比例，并观察是否存在凋亡细胞

作用。环境中微量元素硒与肿瘤的发生发展有密切并测定期含量。

关系，缺硒地区的居民癌症发生率明显升高，体内硒１．４流式细胞仪检测细胞凋亡（１）将犬乳腺癌细

含量与癌症发生率呈负相关ｌ２］。补硒能有效的抑制胞（ＣＭＴ１２１１）用０．０２胰酶一ＥＤＴＡ消化，细胞计

多种人类肿瘤疾病的发生～卜。数得知每孔样本细胞的数目为约为２×１０个，

硒能否对犬乳腺肿瘤有预防和治疗作用，国内０００１ｒ／ｍｉｎ离心８ｍｉｎ。（２）用孵育缓冲液（１０

还未见有这方面的报道。本试验以体外培养的犬乳ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ，ｐＨ７．４１４０ｍｍｏｌ／Ｌ

腺癌细胞为材料，探讨了硒的两种化合物亚硒酸钠、ＮａＣ１，５ｅｒｏｔｏｌ／ＬＣａＣ１２）洗１次，５００～１０００ｒ／ｍｉｎ

甲基硒酸对细胞凋亡的影响作用。离心５ｍｉｎ。（３）离心后重新悬于２００的Ｉ孵育液

１材料与方法中，加入８Ｌ的ＬＦＩＴＣ—ＡｎｎｅｘｉｎＶ和５Ｌ的ＰＩ

１．１材料体外培养的犬乳腺癌细胞（ＣＭＴ１２１１）：染色液，室温下避光孵育１０～１５ｍｉｎ。（４）上机前

由本研究原代培养并通过鉴定；亚硒酸钠：Ｓｉｇｍａ公经过３００目筛，用流式细胞仪检测，ＰＩ和Ａｎｎｅｘｉｎ

司；ＳｅＭＣ：美国ＩＫＴ试剂公司；六孔培养板：ＣｏｓｔａｒＶ—ＦＩＴＣ经荧光激发后分别在６３０ｎｍ和５２５ｎｍ产

公司；胎牛血清：Ｈｙｃｌｏｎｅ；公司流式细胞仪：美国Ｂ—生红色荧光和绿色荧光，从而可以测定细胞凋亡的

Ｄ公司。含量。

１．２细胞的培养和处理（１）将吹打均匀的犬乳腺２结果

癌细胞（ＣＭＴ１２１１）平均接种到６孔细胞培养板中，２．１培养的ＣＭＴ１２１１细胞形态学观察

２４ｈ后换培养液。（２）向不同的孔中加入不同浓度２．１．１正常的ＣＭＴ１２１１细胞形态正常生长的

的药物（Ｎａ。ＳｅＯ。浓度分别为０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ＣＭＴ１２１１细胞贴壁均匀生长，细胞呈典型的上皮

ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ；ＳｅＭＣ浓度分别为０．１２５ｍｇ／ｍＬ、样贴壁生长，多数细胞处于较为旺盛的生长和分裂

０．２５ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ），加入药物后分别在６时期，死亡或者凋亡的细胞少见。

ｈ、１２ｈ、２４ｈ观察细胞的形态，在加入药物２４ｈ后２．１．２ＳｅＭＣ不同剂量和不同作用时问的细胞形