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二硫苏糖醇还原—高效液相色谱法测定蔬菜

中的还原型维生素C和总维生素C含量

作者：郑小曼顾明华沈方科

来源：《江苏农业科学》2016年第07期

摘要：研究建立高效液相色谱法（HPLC）快速检测蔬菜中还原型维生素C含量的方法，

并通过二流苏糖醇（DDT）还原脱氢型维生素C，从而得到总维生素C、脱氢型维生素C含

量。以3%偏磷酸为提取液，乙腈-0.015mol/L磷酸二氢铵溶液（体积比85∶15）为流动相，

流速为1.5mL/min，采用WatersC-18（150mm×3.9mm，5μm）反相色谱分离，用紫外检测

器于254nm波长下检测。结果表明：在1～500mg/L浓度范围内线性良好（r=0.9996），所

有蔬菜样品检测相对标准偏差为0.63%～1.83%，平均加标回收率为99.89%。用该方法测定蔬

菜中维生素C含量，结果稳定、重现性良好，适用于维生素C含量范围较大及颜色各异的多

种蔬菜。

关键词：高效液相色谱法（HPLC）；二流苏糖醇（DDT）；蔬菜；总维生素C；还原型

维生素C

中图分类号：S132；O652.63文献标志码：A文章编号：1002-1302（2016）07-0304-03

维生素C是一种人类必需的营养素[1]，其主要形式为L-还原型、L-脱氢型，最主要的功

能是参与胶原蛋白质的合成，动物缺乏维生素C会造成坏血病[2]。作为一种抗氧化剂和高活

性物质，维生素C参与许多新陈代谢过程，可以保护人体免于自由基的威胁，具有提高免疫

力，预防癌症、心脏病、中风，保护牙齿和牙龈，抗衰老等许多生理作用[2-4]。有研究表明：

一定剂量的维生素C可抗细胞DNA损伤[5]；在老鼠铅中毒的同时及其后，补充维生素C可降

低血铅浓度[6]；此外，维生素C还具有预防乙醇对脑、肝损伤的作用[7]。人类自身不能够制

造维生素C，其广泛的食物来源为各类新鲜果蔬，并且蔬菜中的总维生素C含量相比还原型维

生素C更能够表征蔬菜的营养价值。因此，建立能够快速检测蔬菜中总维生素C含量的方法

十分重要，能为人们的膳食营养提供更为确切的参考，从而有效预防和抵制因体内缺少维生素

C而带来的不利影响，提高人们的工作效率和生活质量。

维生素C的测定方法有多种，各有优缺点。如《中华人民共和国药典》规定的碘量法因其

试验操作时不易把握酸度、碘易挥发等，使得测定结果准确度降低，不适于微量分析；而大多

数水果、蔬菜的提取液具有一定色泽，又使得以颜色变化来辨别其滴定终点的国标法2，6-二

氯靛酚滴定法（GB/T6195—1986《水果、蔬菜维生素C含量测定法（2，6-二氯靛酚滴定

法）》）具有一定的局限性；此外，还包括容量法、苯肼比色法、荧光光度法、电位法、紫外

分光光度法等，但是这些方法或存在所需试剂较多、试剂不稳定、操作繁琐等缺点[8-10]，或

只能测定还原型维生素C含量，不能测定具有同样生理功能的脱氢型维生素C含量，如荧光

法、苯肼比色法[11]。

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高效液相色谱（HPLC）是近年来发展起来的一种快速高效且稳定可靠、发展较快的分离

技术，因其处理样品简单快速，且能同时测定几种维生素而被广泛应用于食品药品中维生素含

量的测定[8-17]。但是，该方法目前主要测定的是还原型维生素C[11]，而对蔬菜中同样具有生

理功能的脱氢型维生素C含量的检测报道较少。本研究通过利用二硫苏糖醇（DTT）能够将脱

氢型维生素C还原而不具有生理活性的二酮古洛糖酸则不会被还原[17-18]，并且与高效液相色

谱法结合，可测定出还原型维生素C、总维生素C含量，从而得出脱氢型维生素C含量，以

总维生素C含量表征蔬菜的营养价值更为准确。

材料1与方法

试剂1.1与材料

乙腈，色谱纯；磷酸二氢铵，分析纯；维生素C标准品，分析纯，维生素C含量

≥99.7%，国药集团化学试剂有限公司；偏磷酸，分析纯；二硫苏糖醇（DTT）；超纯水，笔者

所在实验室自制；0.45μm滤膜，国药集团化学试剂有限公司。小白菜、番茄，市购。

仪器1.2与设备

Waterse2695型高效液相色谱