8139-2024《饮料中维生素B12的测定 高效液相色谱法》.docx

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中华人民共和国轻工行业标准QB/TXXXXX—XXXX

饮料中维生素B12的测定高效液相色谱法

DeterminationofvitaminB12inbeverages-Highperformanceliquidchromatography

（报批稿）

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中华人民共和国工业和信息化部发布

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由中国轻工业联合会提出。

本文件由全国食品工业标准化技术委员会（SAC/TC64）归口。

本文件起草单位：广东省食品工业研究所有限公司（国家轻工业食品质量监督检测广州站）、捷通（广州）检测技术服务有限公司、山西和耀科技有限公司、东鹏饮料（集团）股份有限公司、江苏广海检验检测有限公司、绿城农科检测技术有限公司、东莞市南北检测认证技术有限公司、拜发分析系统销售（北京）有限公司、翁源广业清怡食品科技有限公司。

本文件主要起草人：林丹、刘春丽、顾秀英、胡海娥、段文华、何焜鹏、何晓军、贺丽丽、贝荣廷、范康福、谢颖君、段凯耀、李学莉、陈俊辉、吴凯薇、蓝方存、李柳基、区玉芳、陈奇、李嘉鸿、冯志强、曾健莹、刘文剑。

本文件为首次发布。

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饮料中维生素B12的测定高效液相色谱法

1范围

本文件描述了饮料中维生素B12的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于饮料（不含动物源性成分）中维生素B12含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样中维生素B12经免疫亲和柱净化、富集后，采用液相色谱仪分离检测，外标法定量。

5试剂和材料

除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.2乙醇（C2H6O）：色谱纯。

5.1.3氢氧化钠（NaOH）。

5.1.4磷酸（H3PO4）。

5.1.5三氟乙酸（CF3C0OH）。

5.1.6乙酸钠（CH3COONa）。

5.2标准物质

维生素B12（CAS号：68-19-9）：纯度不小于99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

5.3试剂配制

5.3.1氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取4.0g氢氧化钠于烧杯中，加适量水溶解后，转移至于100mL

容量瓶中，用水稀释并定容。

5.3.2磷酸溶液（0.05%，体积比）：移取0.5mL磷酸于1000mL容量瓶中，用水稀释并定容。超声10min

备用。

5.3.3三氟乙酸溶液(0.04%,体积比):量取500mL水,加入200μL三氟乙酸,混匀。

5.3.4乙酸钠缓冲液(0.25mol/L):称取20.5g无水乙酸钠,用950mL水溶解并用乙酸调pH至4.0

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士0.1,用水稀释并定容至至1000mL容量瓶中。

5.3.5维生素B12标准储备液（1mg/mL）：准确称取维生素B12标准物质（5.2）10mg（精确至0.00001g）

于10mL棕色容量瓶，用乙醇溶解并定容至刻度线，摇匀转移至棕色试剂瓶，于-20℃下避光保存。有效期6个月。

5.3.6维生素B12中间液（1000ng/mL）：移取维生素B12标准储备液（5.3.5）0.05mL于50mL棕色容量

瓶中，用水定容至刻度线。有效期1周。

5.3.7维生素B12标准工作液：分别移取适量维生素B12中间液（5.3.6）用水逐级稀释成浓度为10ng/mL，

20ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，300ng/mL，500ng/mL的标准工作液，现用现配。

5.4材料

5.4.1滤膜：0.22μm，0.45μm水相。

5.4.2免疫亲和净化柱：维生素B12免疫亲和柱（ESAI-EXTRACT?VITAMINB12）或性能相当（柱容

量及柱回收应满足