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甲醇对α-淀粉酶活力及构象影响的研究

作者：张建荣

来源：《家长·下》2020年第02期

摘要：目的：研究甲醇对α-淀粉酶活性及构象的影响。方法：拟合米氏方程求得

Km.Vmax，并探讨甲醇对α-淀粉酶的活性影响。结果：以0.5%的淀粉为底物，加甲醇时

km=0.265mol/L，Vmax=88.496U/min.g，不加甲醇时km=0.0442m01/L，

Vmax=88.495U/min.g，由此可知甲醇浓度在10%-50%范围内时，其对α-淀粉酶具有抑制作

用。结论：本实验为进一步研究淀粉酶抑制剂提供理论基础。

关键词：淀粉;麦芽糖;α-淀粉酶;抑制剂

α-淀粉酶主要催化断开淀粉中α-，4糖苷键，并具有淀粉的液化和糖化作用，α-淀粉酶是

影响饮食中淀粉等消化、吸收的关键酶，抑制其活性可以延缓人体对淀粉的降解和葡萄糖的吸

收，从而抑制餐后血糖的快速升高。因此α-淀粉酶抑制剂常被用于治疗糖尿病。由于寻求α-

淀粉酶抑制剂的成本高，人们更多地从廉价的化学药品中寻找高效的α-淀粉酶抑制剂，因此成

为研究的热门话题。在研究α-淀粉酶的基础上，本研究主要探讨甲醇对α-淀粉酶的抑制效

果。

一、材料与设备

（一）材料

磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、淀粉、麦芽糖、α-淀粉酶、甲醇、DNS、蒸馏水。

（二）设备

电热恒温水浴锅（HH-S4型）：北京科偉永兴仪器有限公司;岛津分析天平（AUY220）、

UV-250：日本岛津;722可见分光光度计;PHS-3D雷磁PH计：上海精科。

二、研究方法

（一）麦芽糖标准曲线的制作

取8支干净的试管，量取1mg/ml的麦芽糖，体积（m1）分别为0，0.2，0.6，1.0，1.4，

1.8，2.0，在37℃下保温3min，再加入DNS试剂2ml，沸水浴5min，流水冷却，蒸馏水定容

至25m1，在540nm处测OD值。

（二）α-淀粉酶活性的测定

取1.5支干净的试管，分别编号1-5。

准确量取2.0.5%的淀粉0.5ml于5个试管中，每个试管中加入对应的甲醇浓度为10%，

20%，30%，40%，50%，样品管中分别加入10mg/ml的淀粉酶0.5m1，5只试管分别用蒸馏水

补齐至2.0m1.

3.2.3、37℃下保温3min，然后加入DNS试剂2ml，沸水浴5min，流水冷却，蒸馏水定容

至25ml，在540nm处测OD值。

（三）用1/s和1/v双倒数法作图计算Km和Vm

取1.8支干净的试管，分别编号1和1’，2和2’，3和3’，4和4’，1，2，3，4号管做为

对照。

准确量取2.0.5%的淀粉溶液0.05ml于1和1’试管中再加入甲醇0.8ml，1’号管中加入

lmg/ml的淀粉酶0.5ml，然后两试管用蒸馏水补齐至2ml;准确量取0.5%的淀粉溶液0.1ml于2

和2’试管中，再加入甲醇0.8ml，2’号管中加入1mg/ml的淀粉酶0.5ml，然后两试管用蒸馏水

补齐至2ml;准确量取0.5%的淀粉溶液0.2ml于3和3’试管中，再加入甲醇0.8ml，3’号管中加

入1mg/ml的淀粉酶0.5ml，然后两试管用蒸馏水补齐至2ml;准确量取0.5%的淀粉溶液0.4ml

于4和4’号试管中，再加入甲醇0.8ml，4’号管中加入1mg/ml的淀粉酶0.5ml，然后两试管均

用蒸馏水补齐至2ml。

℃3.37下保温3min，再加入DNS试剂2ml，沸水浴5min，流水冷却，蒸馏水定容至

25ml，在540nm处测OD值，根据方程1/V=（1/[S]）Km]Vmax+1/Vgmax，以1/V为纵坐标，

1/[S]为横坐标作图，求得Km及Vmax值。

（四）用1/s和1/v双倒数法作图计算Km和Vm

不加甲醇，其它操作同上3.3。

（五）不同浓度甲醇处理后α-淀粉酶紫外吸收光谱

取1.7支干净的试管，分别编号0，0，1，2，3，4，5。

准确量取2.0.5mllOmg/ml的淀粉酶于每支试管中，依编号向每支试管中分别加入甲醇