猪瘟病毒E2蛋白纳米颗粒疫苗的研发.pdfVIP

目录

摘要I

AbstractIII

第一章绪论1

1.1猪瘟的发现分布及分类1

1.2猪瘟病毒基因及其蛋白结构和功能1

1.3猪瘟临床特征与流行病学特征3

1.3.1流行病学特征3

1.3.2临床特征3

1.4猪瘟致病机制和病理学特征4

1.5猪瘟实验室诊断及检测4

1.6猪瘟疫苗研究进展5

1.6.1减毒活疫苗5

1.6.2标记疫苗5

1.7E2蛋白的抗原表位筛选7

1.8VLP的研究进展8

1.8.1病毒蛋白自组装VLP8

1.8.2SpyCatcherVLP10

1.8.3VLP疫苗免疫效力的研究10

1.8.4VLP表达系统11

1.9研究目的与意义14

第二章CSFVE2蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及蛋白制备条件的优化16

2.1实验材料16

2.1.1基因、菌种、细胞与质粒16

2.1.2实验试剂17

2.1.3实验仪器17

2.1.4主要试剂和溶液配制18

2.2实验方法19

2.2.1CSFVE2蛋白杆状病毒表达载体构建20

2.2.2重组杆粒的获得22

2.2.3重组杆状病毒的获得22

2.2.4重组杆状病毒的传代与扩增23

2.2.5Westernblot鉴定CSFVE2蛋白的表达24

2.2.6CSFVE2蛋白的胞内表达及结果分析24

2.2.7CSFVE2蛋白的分泌性表达及结果分析25

2.2.8CSFVE2蛋白在杆状病毒表达系统中表达条件的优化25

2.2.9CSFVE2蛋白的纯化及纯化条件的优化27

2.3结果与分析28

2.3.1CSFVE2基因的PCR扩增28

2.3.2重组杆粒的PCR鉴定29

2.3.3Sf9细胞病变观察30

2.3.4CSFVE2蛋白表达的Westernblot验证30

2.3.5CSFVE2蛋白的胞内表达与分泌性表达分析31

2.3.6CSFVE2蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及表达条件的优化32

2.3.7CSFVE2蛋白的纯化及纯化条件的优化32

2.4讨论35

第三章SpyVLP的表达纯化及E2-SpyVLP纳米颗粒疫苗的制备36

3.1实验材料36

3.1.1菌种与质粒36

3.1.2主要试剂36

3.1.3实验仪器37

3.1.4实验动物37

3.2实验方法37

3.2.1SpyVLP重组质粒的鉴定37

3.2.2SpyVLP的表达及鉴定38

3.2.3SpyVLP的可溶性分析38

3.2.4硫酸铵沉淀法纯化SpyVLP39

3.2.5TEM和DLS分析39

3.2.6E2蛋白与SpyVLP结合条件及结合比例的优化40

3.2.7E2-SpyVLP稳定性检测40