薄层层析法分离色素.pdfVIP

先天下之忧而忧，后天下之乐而乐。——范仲淹

实验八色素的分离(层析法)

一、目的要求

1．掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法。

2．掌握吸附剂活度测定的原理及方法。

3.掌握偶氮苯和苏丹红（III）的分离方法

二、实验原理

薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄

层。把欲分离的样品点在薄层板的一端，然后将点样端浸入适宜的展开剂中,在密闭的层析

缸中展开，使混合物得以分离的方法。由于层析在薄层上进行故而得名。

薄层层析是一种微量、快速的层析方法。它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合

物的分离、提纯及含量的测定，还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。

薄层层析根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤

维素、硅胶、硅藻土)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。

薄层层析中以吸附薄层为多用，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶（氧化铝的活化温

度为150℃－160℃，硅胶的活化温度为105℃－110℃）。吸附薄层主要是利用吸附剂对样

品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。分配

薄层层析在展开过程中，各成分在固定相和流动相之间作连续不断的分配，由于各成分在两

相间的分配系数不同，因而可以达到相互分离的目的。

薄层层析选择展开剂视被分离物的极性及支持剂的性质而定。如果薄层层析所用的支持

剂是吸附剂，在同一吸附剂上，不同化合物的吸附性质有如下规律：1.饱和碳氢化合物不易

被吸附；2.不饱和碳氢化合物易被吸附，分子中双键愈多，则吸附得愈紧密；3.当碳氢化合

物被一个功能基取代后，吸附性增大。吸附性较大的化合物，一般需用极性较大的溶剂才能

推动它。选择展开剂的另一个依据是溶剂的极性大小。极性大的化合物需用极性大的展开剂，

极性小的化合物需用极性小的展开剂。一般情况下，先选用单一展开剂如苯、氯仿、乙醇等，

如发现样品个组分的R值较大，可改用或加入适量极性小的展开剂如石油醚等。反之，若

f

样品的个R值较小，则可加入适量极性较大的展开剂展开，或在原来的溶剂中加入一定量

f

极性较大的溶剂进行展层。在实际工作中，常用二种或三种溶剂的混合物作展开剂，这样更

有利于调配展开剂的极性，改善分离效果。通常希望R值在0.2-0.8范围内，最理想的R

ff

值是0.4-0.5之间。

先天下之忧而忧，后天下之乐而乐。——范仲淹

溶剂极性大小的次序是：石油醚二硫化碳四氯化碳三氯乙烯苯二氯甲烷

氯仿乙醚乙酸乙酯乙酸甲酯丙酮正丙醇甲醇水。

三、时间安排

步骤所需时间/h

薄层板的制备1.0

硅胶的活度测定1.0

薄层板的应用2.0

合计4.0

四、实验材料、试剂与仪器

1.仪器与设备

载玻片、玻璃片、毛细管、层析缸、滴瓶、喷雾瓶、电吹风、喷雾器、烘箱、干燥器、

直尺。