〖医学〗流感病毒的分离鉴定.ppt

流感病毒的别离鉴定;目的：熟悉病毒血凝、血凝抑制试验的方法及其应用。

原理：流感病毒颗粒外表有血凝素,具有使鸡、豚鼠等血细胞凝集的能力。把一定浓度的鸡红细胞加到待检的鸡胚尿囊液或羊水中，如出现血细胞凝集现象，即表示有病毒存在；如血凝阳性，那么可进一步用血凝抑制试验进行病毒鉴定，流感病毒的血凝性，可被免疫血清中的特异性抗体所抑制，使其失去凝集作用，借此可用抗体鉴定未知病毒及病毒的型、亚型。;实验材料

(1)接种流感病毒的鸡胚。

(2)质量分数为0．5％的鸡红细胞悬液。

(3)流感病毒型与亚型免疫血清。

(4)碘酒，酒精消毒棉球。

(5)灭菌的镊子、剪刀。

(6)无菌小试管，毛细滴管，吸管。

(7)生理盐水。

(8)试管、试管架。;实验方法：

1、血细胞凝集实验

(1)收获尿囊液：鸡胚孵育3d后,放4度冰箱过夜,次日取出鸡胚,消毒气室端卵壳,用小镊子在无大血管处撕破卵膜,以无菌毛细管吸取尿囊液,放入无菌试管中。

(2)取尿囊液0．1mL,作1：10稀释。;;;(3)取10支小试管，按给各管参加生理盐水。

(4)取1：10稀释的尿囊液0．2mL，加人第1个试管中，混匀后，再吸出0．2mL参加第2个试管中；混匀后，从第2个试管吸出0．2mL参加第3个试管……依次作倍比稀释至第九管，混匀后自第9个试管中取出0．2mL弃掉。这样各管液体量均为0．2mL，从第1-9个试管的尿囊液稀释度为1:20，1:40，…，1:5120，第10个试管为生理盐水对照管。

(5)稀释完毕后加人体积分数为0．5％的压积鸡红细胞悬液，每管0．2mL,室温放置30~60mn。;流感病毒血凝试验;㈠㈡㈢㈣㈤㈥㈦㈧㈨㈩;(6)结果观察

观察时要轻拿、勿摇，首先观察对照管应无凝集，然

后再观察试验管，各管出现的凝集程度以“++++〞、“+++〞、“++〞、“+〞、“—〞表示，判断标准如下：

“++++〞：全部红细胞凝集，凝集的红细胞铺满管底，边缘不整齐。

;“+++〞：大局部红细胞凝集，在管底铺成薄膜状，但尚有少数红细胞不

凝，在管底中心形成小红点。

“++〞：约有半数红细胞凝集，在管底铺成薄膜，面积较小，不

凝集的红细胞在管底中心聚成小圆点。

“+〞：只有少数红细胞??集，不凝集的红细胞在管底中心聚成小

圆点，凝集的红细胞在小圆点的周围。

“—〞：不凝集，红细胞沉于管底，呈一边缘整齐的致密圆点。

;凝集效价：能使红细胞呈“++〞凝集的病毒最高稀释度为凝集效价，表示含有一个单位血凝抗原。

如表，第6个试管为“++〞，且病毒稀释度最高，那么该病毒悬液效价为1:640，即该病毒悬液稀释到1：640时，每0．2mL中含有一个血凝单位，配制4个血凝单位的病毒悬液时，病毒液应稀释成(1：640)X4，即1：160。;2、血细胞凝集抑制试验

;结果观察

先观察3支对照管，如抗原对照管出现完全凝集，血清对照和红细胞对照不发生凝集，再观察试验管。

血凝抑制效价：完全抑制红细胞凝集的血清最高稀释度，即该血清的抑制效价。

鉴定病毒时，效价应与原免疫血清效价相等或相似，血凝抑制试验亦可用病毒抗原，测定病人血清抗体以进行血清学诊断，恢复期比初期抗体效价增高4倍以上才有诊断意义。;1、病毒性肝炎：由病毒造成的肝炎按照其病毒系列不同分为甲、乙、丙、丁、戊和庚共六种类型病毒性肝炎。能引起肝脏细胞肿胀，是世界上流传广泛，危害很大的传染病之一。

1908年，才发现病毒也是肝炎的致病因素之一。1947年，将原来的传染性肝炎〔infectioushepatitis〕称为甲型肝炎〔HepatitisA,HA〕；血清性肝炎〔serumhepatitis〕称为乙型肝炎〔HepatitisB,HB〕。1965年人类首次检测到乙型肝炎的外表抗原。我国经济和科学技术日益开展，学术文化领域百家争鸣，〔df高血压958心脏病983u6糖尿病87fr〕特别是思想家的革新精神，为中医学理论的创新和突破性进展，提供了有利的文化背景。宋代陈无择著?三因极一病证方论?一书，〔45传染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh〕提出三因学说；并产生了最具盛名四大学派，刘完素倡导炽热论；张从正力倡“攻邪论〞；李杲提出“内伤脾胃，百病由生〞的理论；朱震亨创造性地说明了相火的演变规律。

编辑本段明清时期〔df肺25s血液f369血小板t5172红血球gdf55m白血球fd2〕

是中医学理论综合汇编、深化开展，临床各科辨证体系丰富、提高阶段。如明代楼英的?医学纲目?和王肯堂的?证治准绳?，清代吴谦等编著的?医宗金鉴?和陈梦雷主编的?古今图书集成