人教版教学课件专题5-课题3-血红蛋白的提取和分离.pptVIP

血红蛋白两个α－肽链两个β一肽链四个亚铁血红素基团每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。血红蛋白的特点：原理：凝胶：凝胶色谱法（分配色谱法）一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖）概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法一、基础知识用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质A．路程较长，移动速度较慢B．路程较长，移动速度较快C．路程较短，移动速度较慢D．路程较短，移动速度较快D12相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个B能够抵制（）对溶液的（）的影响，维持PH基本不变。01外界的酸或碱02PH值03㈡缓冲溶液：㈢电泳：⑴.概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。⑵.电泳原理：电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。⑶.常见电泳类型：①琼脂糖凝胶电泳②聚丙稀酰胺凝胶电泳③SDS——聚丙稀酰胺凝胶电泳迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小、形状。电泳迁移率完全取决于分子的大小。使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A电荷的多少B分子的大小C肽链的多少D分子形状的差异分离血红蛋白溶液有机溶剂（无色透明的甲苯层）01020304脂类物质（白色脂溶性物质沉淀层）血红蛋白溶液（红色透明液体）红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物）分离血红蛋白溶液是低速短时间离心分离红细胞时采用低速长时间离心红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h下列操作正确的是（D）在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是A洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果C洗涤过程选用0.1%的生理盐水D透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质D2.凝胶色谱操作:.凝胶色谱柱的制作：注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。⑵.凝胶色谱柱的装填①凝胶的选择：②凝胶的前处理：③凝胶色谱柱的装填方法：注意：1.凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。2.装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。④洗涤平衡：装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在50cm高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸缓冲液（pH为7.0）充分洗涤平衡12小时。注意：1.液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。2.不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。50cm高装配好的凝胶柱