临床生物化学检验常用技术.ppt

仪器可见分光光度计仪器紫外-可见分光光度计Beckman紫外-可见分光光度计eppendorf紫外-可见分光光度计（四）分光光度计的操作方法A.分光光度计的基本操作以721-A型分光光度计为例，其基本的操作步骤为：将波长旋至测定的波长。将空白液、校准液或待测液放入比色池，将空白液置于光路中。将开关置于T位，打开比色池盖子，用光量粗调和光量细调调节T为0.0,关上1.开721-A分光光度计的开关，将比色池的盖子打开，通电20分钟使仪器预热。01将开关置于A，用消光调零调节A为0.0重复步骤4和5将校准液或待测液推入光路，测量溶液的吸光度（A）比色池盖子，调节T为100.0。02吸光度的校正铬酸钾的标准液可用于校正分光光度计的吸光度。在25℃，将4mg铬酸钾溶于100ml的0.05mol/LKOH中，放入比色池中，在不同波长下测定吸光度值，与己知的标准吸光度校正表进行比较，可检测仪器吸光度的准确度。12使用图示 打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0%T”旋钮，使数字显示为“00.0”。开启电源，指示灯亮，仪器预热10分钟，选择开关置于“T”。旋动波长手轮，把测试所需的波长调节至刻度线处。将装有溶液的比色皿放置比色架中。盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节透过率“100%T”旋钮，使数字显示为“100.0T”（如果显示不到100%T，则可适当增加灵敏度的档数，同时应重复“2”，调整仪器的“00.0”）。 将参比溶液比色皿置于光路中，将选择开关置于A，旋动吸光度调零旋钮，使得数字显示为.000，然后移入被测溶液，显示值即为试样的吸光度A值。全部测定结束后，取出比色皿(洗净)，关闭开关.三、分光光度技术的定性和定量方法（一）分光光度技术的定性方法定性依据：最大吸收波长λmax和摩尔吸光系数ε2.摩尔吸光系数ε方法1.最大吸收波长λmax方法（二）分光光度技术的定量方法1.标准曲线法将一系列浓度不同的标准溶液按照一定操作过程显色后，分别测吸光度(A)，以A为纵坐标，浓度为横坐标制标准曲线(至少要5点)。在相同条件下处理待测物质并测定其吸光度，即可从标准曲线找出相对应的浓度方法：AXCXC（浓度）A（吸光度）STEP5STEP4STEP3STEP2STEP1制作和应用标准曲线时应注意下面几点：测定条件发生变化时（如更换标准品和试剂等），应重新绘制。标准品应有高的纯度，标准液的配制应准确。当待测液吸光度超过线性范围时，应将标本稀释后再测定。标本测定的条件应和标准曲线制作时的条件完全一致。同时测定标准管和标本的吸光度，根据测定的吸光度及标准品浓度，可直接计算出标本的浓度，计算公式为：其中Cx和Ax为标本管浓度和吸光度，Cs和As分别为标准管浓度和吸光度。用标准品法定量时，标准品的浓度应尽量和标本管浓度相近。己知浓度的标准品和标本作同样处理，使用相同的空白，020103050604CX=(AX×Cs)/As2．比较法3．其它分析方法包括差示法、多组份混合物分析和利用摩尔吸光系数分析等方法。其它光谱分析技术火焰光度法基本原理2．组成3．原子吸收分光光度法的特点荧光光度定量分析法4．荧光光度分析技术的应用基本原理2．影响荧光强度的因素（三）荧光光度分析法（二）原子吸收分光光度法基本原理2．组成火焰光度法——等离子体发射光谱法原子吸收分光光度法荧光光度法NanoDrop?ND-3300Fluorospectrometer第二节电化学分析01电化学分析方法基本原理02离子选择电极分类03离子选择电极的分析方法0401电化学分析是利用物质的电化学性质，测定化学电池电位、电流或电量的变化进行分析的方法。03电导法：通过电阻测定以求物质含量的分析方法04电容量分析法：借助某些物理量的突变作为分析重点的指示02电位分析法：测定原电池电动势以求物质含量的分析方法电化学分析方法电位分析法是利用电极电位和浓度之间的关系来确定物质含量的分析方法。电化学分析方法基本原理原电池是利用两个电极之间金属性的不同,产生电势差,从而使电子的流动,产生电流.又称非蓄电池，是电化电池的一种。电池电动势和电极电势电池电动势：将电位差计接在电池的两个电极之间而直接测得的电势值习惯上称之为电池的电动势电极电势：当采用相对电势法时，系用一定的参比电极与研究电极组成电池，这一电池的电动势称为相对于给定参比电极而确定的研究电极电势。(金属和溶液相接触的内电位差即为金属电极和