盐单胞菌X339的遗传操作系统构建及PHA发酵优化.pdf

目录

摘要I

AbstractIV

第一章引言1

1.1基于极端微生物的下一代工业生物技术1

1.1.1极端微生物定义及特性1

1.1.2嗜盐菌概述1

1.2聚羟基脂肪酸酯（PHA）2

1.2.1PHA的结构及分类3

1.2.2PHA的应用4

1.2.3PHA的生物合成途径5

1.2.4嗜盐菌合成PHA6

1.3嗜盐细菌的遗传操作系统及在PHA代谢工程中的应用9

1.3.1遗传转化方法10

1.3.2基因编辑工具11

1.3.3PHA合成的代谢工程改造12

1.4研究目的、内容及意义13

第二章实验材料与方法15

2.1实验材料15

2.1.1实验使用菌株及质粒15

2.1.2实验使用引物16

2.1.3分子生物学试剂19

2.1.4常用生物化学试剂19

2.1.5DNA分子量标准物20

2.1.6实验仪器与设备21

2.2实验方法22

2.2.1丰富培养基配置22

2.2.2抗生素母液的配置22

2.2.3MMG30培养基配置23

2.2.4X339菌株生理特性检测25

2.2.5X339菌株摇瓶发酵实验26

2.2.6产物PHA检测分析27

2.2.7高效液相色谱分析28

2.2.8X339菌株扫描电镜观测样品的制备28

2.2.9X339菌株透射电镜观测样品的制备29

2.2.10常规的分子生物学操作方法29

2.2.11E.coliS17-1感受态细胞制作32

2.2.12E.coliDH5α和E.coliS17-1感受态细胞的质粒转化33

2.2.13X339菌株的质粒转化33

2.2.14实验所用数据库及软件35

2.2.15菌株保藏35

第三章X339菌株的分类鉴定及生理特性检测36

3.1本章引论36

3.2适应低盐浓度的嗜盐菌X33936

3.2.1X339菌株的分类鉴定37

3.2.2H.nigrificansX339的菌落及细胞形态38

3.3H.nigrificansX339的生理特性39

3.3.1X339的最适生长温度40

3.3.2X339的最适生长氯化钠浓度40

3.3.3X399菌株最适生长pH41

3.3.4X339碳源利用能力42

3.4本章小结45

第四章H.nigrificanX339利用多种碳源合成PHA47

4.1本章引论47

4.2H.nigrificanX339以葡萄糖为碳源进行PHA发酵测试47

4.3利用MOPS缓冲剂优化H.nigrificanX339的PHB发酵条件49

4.4H.nigrificanX339利用多种碳源合成PHB50

4.5X339利用小麦秸秆水解液通过开放式无灭菌发酵合成PHB52