UPLC H-class 操作规程 _原创精品文档.pdfVIP

WatersUPLCH-class操作规程

一．准备

1、配制样品和标准品溶液，并放入样品盘。

注：样品瓶内溶液一般1/3~3/4之间。

2、根据待测样品的需要更换合适的色谱柱。

注：①色谱柱方向与流动相流动方向一致。

②立式柱温箱中色谱柱及流动相方向应“下进上出”，防止断流。

3、准备流动相及清洗液：

流动相用合适的0.45um滤膜过滤，并“真空-超声”脱气2~3min。

注：①水相用水膜滤过，有机相用有机膜滤过。

②使用UPLC柱时，流动相用0.22um滤膜滤过。

③MS（清洗灌注密封圈）：常用5%~10%甲醇或乙腈。

Wash（强洗，针外壁）：常用50%以上的甲醇或乙腈。

SM1（弱洗，注射器）：常用10%~20%的甲醇或乙腈。

4、检查仪器各部分的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

二．开机

1、接通总电源。

2、依次打开样品管理器（FIN）、四元溶剂管理器（QSM）的电源开关。

3、待FIN、QSM自检完成，打开电脑。

4、双击“ACQUIYUPLC”快捷键，打开控制台。

5、灌注溶剂：QSM→【控制】→【灌注溶剂】→选择管路。

6、清洗进样针及注射器：FIN→【控制】→【灌注】。

7、清洗灌注密封圈：QSM→【控制】→【灌注密封圈清洗】。

注：若管路干了，需用注射器抽取至液体流出。

8、平衡色谱柱：QSM→【控制】→【设置流动相】→平衡约15min。

注：一般用10%甲醇或乙腈。

9、打开检测器电源开关，待检测器自检完成，一般需要30min。

注：若FIN、QSM和检测器“通讯失败”，则分别点击各自菜单：【控制】→

【重设】。

三．项目建立

1、运行Empower3软件，用户账号：system；密码：manager。

2、点击【配置系统】，进入界面。

3、新建项目：在界面中，右击→【新建】→【项目】。

注：①表空间≥200MB，不启用备注设定。

②源项目：一般选用“Defaulte”做模板。

③父项目（存放位置）及名称按照“项目建立规范”建立。

四．参数设置

1、点击【运行样品】，选择合适的“系统”和“项目”。

2、新建方法组及仪器方法：

【编辑】菜单→【新建方法组】→启用“向导”→点击【新建】，进入“新建仪器

方法”窗口→设置参数：FIN（流动相及其比例，流速)，QSM(柱温)，检测器（波

长）等→保存→关闭新建仪器方法窗口→在“新建方法组”窗口中选择“仪器方法”

等→保存→关闭窗口。

注：①PDA的3D扫描波长范围190~500。

②梯度洗脱中“曲线”默认为6。并在梯度最后阶段回归初始比例。

③使用已有仪器方法：在“仪器方法”小窗口中→直接在“下拉菜单”中选

择已有的仪器方法。

3、建立批处理表：设置样品板、位置、样品名称、进样数、类型、方法组、时

间等。

注：首先要选择“样品板类型”：AMSI-48Vial2mlHolder。

四．采集数据

1、基线检查：点击仪器方法下的【监视】，进行基线检查，一般30~60min。

2、开始进样：点击工具栏【开始】图标（绿色）。

3、中断：点击工具栏【中断】图标（红色），选择需要的“中断类型”。

4、再继续：点击工具栏【开始】图标，继续运行。

五．数据处理

1、点击【浏览项目】，选择需要的“项目”。

2、查看数据：在“通道”下选中数据，右击→【查看】。

3、新建“处理方法”：点击工具栏【使用处理方法向导】，然后逐项完成。

4、积分：点击工具栏【积分】→手动修改→【校正】→保存。

5、批处理：在“通道”下选中多个数据，右击→【处理】→选择指定的处理方法。

六．打印报告

在“结果”下选择数据，右击→预览/出版→选择“报告方式”→进入预览图界面

→点击【关闭】→进入编辑窗口，进行编辑→点击工具栏【打印】图标。

七．关机

1、退出Empower3软件。

2、关闭检测器电源开关。

3、冲洗色谱柱：

注：含盐时，先用10%的有机相冲30min，再用90%的有机相冲30min。

4、清洗灌注密封圈：