DB51T 1539-2012 油菜根肿病菌土壤带菌PCR检测技术规程　.pdfVIP

ICS

DB51

四川省地方标准

DB51/T1539—2012

油菜根肿病菌土壤带菌PCR检测技术规程

2012-12-20发布2013-03-03实施

四川省质量技术监督局发布

DB51/XXXXX-2012

目次

前言II

1范围1

2规范性引用文件1

3原理1

4试剂及材料1

5仪器和设备2

6田间土壤取样2

7实验室检测2

8结果及判断3

9废弃物处理3

附录A(资料性附录)油菜根肿病基本信息4

I

DB51/XXXXX—2012

前言

本标准附录A为资料性附录。

本标准按照GB/T1.1—2000规则进行编写。

本标准由四川省农业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准起草单位：四川省农业科学院植物保护研究所。

本标准主要起草人：刘勇、黄小琴、张蕾、尹全、刘红雨、周西全、杨晓蓉。

Ⅱ

DB51/XXXXX—2012

油菜根肿病菌土壤带菌PCR检测技术规程

1范围

本标准规定了油菜根肿病菌土壤带菌PCR检测技术方法。

本标准适用于油菜根肿病菌的土壤带菌检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法。

3原理

油菜根肿病是由芸薹根肿菌(PlasmodiophorabrassicaeWoron)引起的专性寄生性土传病害。该

菌属原生动物界、根肿菌门根肿菌纲根肿菌(Plasmodiophora),主要侵染十字花科作物，通过农事操

作、种苗带菌、灌溉等多种方式进行传播。病原菌以休眠孢子(囊)随病残体在土壤中越冬，在土中能

存活15年以上，PCR检测法是检测土壤中根肿病病原的有效方法，可检测最低限值为10°个休眠孢子/g土

壤。

4试剂及材料

除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682-1992的灭菌双蒸水。

—PCR反应混合物2×MasterMix:TaqDNA聚合酶，2×PCR反应缓冲液，MgSOg,dNTP混合物以及

稳定剂，优化剂等。

—-溶菌酶。

——三氯甲烷(CHCl₃)。

———异戊醇(C₅H₁₂O)。

———异丙醇(C₃H₈O)。

——无水乙醇(CH₈O)。

——琼脂糖：电泳级。

—DNA荧光染料(GV)。

———分子量标记：DL-1000。

——TENP缓冲液：50mmol/LTris(pH8.0),20mmol/LEDTA,100mmol/LNaC1,1%[W/V]PVP。

—土壤DNA提取液：100mmol/LTris(pH8.0)