纸层析法分离氨基酸实验报告.pdfVIP

乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》

纸层析法分离氨基酸

一、前言

纸层析法

纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一种分离技术。本世

纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子

中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子

生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。它是一种以纸为载

体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相

溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰

胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展

开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分

离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定

斑点位置。根据组分移动距离(Rf值)与已知样比较，进行定性。用

斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量(如

光度法、比色法等)。

纸层析法(paperchromatography)是生物化学上分离、鉴定氨

基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定

量测定;也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、

抗菌素等物质的一种分离分析工具。纸层析法是用滤纸作为惰性支持

物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有

机溶溶剂是流动相。

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乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》

在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些

精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。

做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体

与层析液(石油醚)混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析

液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素

的相对含量和种类。

纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括

胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度

不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢;含量较多

者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法

能清楚地将叶绿体中的色素分离。

氨基酸

氨基酸是构成蛋白质的基本单位，广泛用于食品、医药、添加剂

及化妆品行业。随着生物工程技术产业的发展逐渐成为2l世纪全球

的主要产业之一，氨基酸的需求量越来越大，品种变更越来越快，工

艺改革越来越新。目前全世界氨基酸每年的产量为100万吨，而需求

总量是800万吨。我国自20世纪60年代起，氨基酸的应用在食品工

业占61,，在饮料工业占30,，医药、日用化工、农业、冶金、环保、

轻工、生物工程技术等方面占用的比例逐年增加。

氨基酸在人类生活的很多方面都有着应用:

（1）在食品行业的应用

（2）在医药工业的应用

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乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》

（3）在饲料添加剂行业的应用

（4）在化妆品行业的应用

（5）在农业上的应用

（6）在其他行业的应用

氨基酸工业还有着广阔的发展前景:

（1）传统的氨基酸生产方法

（2）